2024年肉苁蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作用

年肉双蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作用2024肉芨蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作用作者王虎，李文伟，蔡定芳，杨茹肉茯蓉；1甲基4苯基叱咤离子；帕金森病；生存率帕金森病Parkinson7s disease,PD是中枢神经系统进行性变性疾病一旦出现临床症状，其黑质纹状体系统多巴胺神经元已经减少了60%〜80%尽管神经科学家采取包括左旋多巴制剂在内的各种治疗方法，但目前所有的研究都提示无法阻止其进展生长抑制和DNA损伤诱导基因153growth arrestand DNAdamageinduced gene153,GADD153是调控细胞凋亡的一种重要蛋白，在细胞内质网应激等应激状态下大量表达并转位于细胞核［1］本研究观察了肉女蓉提取物对1甲基4苯基叱咤离子lmethyl4phenylpyridinium ion,MPP介导的SHSY5Y多巴胺能细胞系损伤的保护作用及对GADD153表达的影响，并探讨了其对帕金森病的神经保护作用1材料与方法

1.1材料肉取蓉提取物，上海市东方科技公司产品，PBS稀释成10mg/ml,22pm滤膜过滤灭菌；MPP,Sigma公司产品，无菌蒸储水稀释成4mol/L;胎牛血清、达尔伯克改良伊格尔培养基Dulbeccos modifiedeagles medium,DMEM、胰蛋白酶，均为Gibco公司产品；GADD153小鼠抗人单克隆抗体，Santa Cruz公司产品；小鼠抗人pactin单克隆抗体，Sigma公司产品;甲基嘎嗖基四嘤methyl thiazolyltetrazolium,MTT，荷兰Duchefa公司产品；反转录试剂盒reverse transcriptasepolymerasechain reaction,RT7PCR,MBI公司产品;SH7SY5Y细胞，复旦大学神经生物学国家重点实验室黄芳老师惠赠

1.2实验方法121细胞培养及分组SH7SY5Y细胞每2〜3d用10%DMEM培养液换液1次待细胞增长至80%融合时用

0.25%胰酶消化细胞，按1x105分瓶传代，置于5%CO2的细胞培养箱中实验用细胞分为对照组、MPP组和肉放蓉提取物不同浓度组用DMEM培养液将MPP按1:10梯度稀释成400mmol/L,按1:100体积比例加入96孔板或6孔板中，使MPP终浓度分别为

0.

25.

0.

5.

1.2和4mmol/L肉灰蓉提取物用DMEM培养液按1:10梯度稀释成1mg/ml与10pg/ml两个工作浓度按1100加入96孔板或6孔板中，使终浓度分别为

1、10和lOOpg/ml6孔板每孔总体积为2ml,96孔板每孔总体积为2003每项相同实验均重复3次122MTT检测细胞活性

1.221MPP对SHSY5Y细胞存活率的影响1x104密度SHSY5Y细胞200Ml接种于96孔板,24h后换含MPP终浓度分别为

0.

25、

0.

5、神2和4mmol/L的培养液,每浓度3复孔，置于5%CO2培养箱37孵育，分别于

6、

12、24和48h时各孔加入MTT20川，继续孵育4h取出培养板吸弃培养液，每孔加入二甲基亚飒（dimethyl sulphoxide,DMSO）150pl充分震荡10min,待蓝色颗粒完全溶解后用全自动酶标仪（Biorad产品）570nm处测定吸光度值L222肉获蓉提取物对MPP介导的SH7SY5Y细胞损伤的影响终浓度1mmol/L MPP与肉灰蓉提取物分别为L10和100pg/ml同时力口入96孔板置5%CO2培养箱37（孵育48h其余步骤同

122.

11.

2.3RT7PCR检测GADD153的mRNA表o达终浓度1mmol/L MPP与肉女蓉提取物分别为

1、10和100pg/ml,同时加入6孔板置5%CO2培养箱37（2孵育48h取出6孔培养板，PBS冲洗，按Trizol法提取总RNA取1pg RNA,o O按反转录试剂盒说明进行逆转录聚合酶链反应总体积为25口1引物序列为:GADD153上游引物，57GCACCTCCCAGAGCCCTCACTCTCC731；下游引物，5GTCTACTCCAAGCCTTCCCCCTGCG3,;[3actin上游引物,5ATCGTGGGCCGCCCTAGGCAC3f；下游弓I物，57TGGCCTTAGGGTTCAGAGGGGC3扩增目的产物的长度分别为422bp和244bp94＜预变性5min循环参数为:95℃变性

0.5min,60℃退火

0.5min,72℃延伸1min,共35个循环取PCR产物4川,电泳后拍照124Western blotting检测GADD153蛋白表达终浓度1mmol/L MPP与肉双蓉提取物分别为

1、10和100pg/ml,同时加入6孔板置5%CO2培养箱37T孵育48h取o出6孔培养板,PBS冲洗,加入60pl蛋白裂解液裂解,超声震荡，100°C变性10mino用Lowry法测定样品蛋白浓度电泳积层胶60V30min,分离胶120V90min;PVDF膜转膜110V100min加1:50小鼠抗人GADD153单克隆抗体，4乙过夜TBST溶液洗涤3次，10min/o次，加含HRP的兔抗小鼠二抗室温孵育2h，化学发光法显影X胶片胶片用Alpha Image950自动扫胶系统得到条带灰度值每个样本的免疫印迹条带均与同一样本的Pactin比较后作统计学分析L3统计学方法采用SPSS

11.5软件进行单因素方差分析计量资料数据用X±s表示2结果

2.1MPP对SH7SY5Y细胞存活率的影响不同浓度MPP作用SH7SY5Y细胞后，细胞存活率随MPP的浓度增加而降低；MPP1mmol/L浓度状态下细胞存活率随时间增长而降低呈现明显的量效与时效关系见图1其中MPP1mmol/L组在48h存0活率为

45.30±

3.21%，低于50%故选用1mmol/L MPP作为制作帕金森病细胞模型的处理剂量图1不同浓度MPP对SH7SY5Y存活率的影响略Figure1Effects ofdifferent concentrationsof MPPon cellviability ofSH7SY5Y

2.2本文来源网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！。