完整过氧化氢酶CAT活性的测定

过氧化氢酶（）活性的测定紫外吸收法CAT

一、目的与要求过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定

二、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂可根据H2O2的消耗量或的生成量测定该酶活力大小过氧化氢在波长下有强烈吸收，过氧02240nm化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度（A240）随反应时间而降低根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酸的活性

三、材料、仪器设备及试剂材料小麦或其它叶片

（二）仪器设备.研钵；.紫外分光光度计；.离心机；.恒温水浴；

1234.容量瓶5

（三）试剂:磷酸缓冲液

1.

0..mol/.pH

7.8（pH

7.

8.

0.2mol/.Na2HP

0.

91..ml.

0.2mol/.NaH2P

0..

8..ml）；（的溶液稀释至）

2.

0.1mol/LH2O230%H2O

25.68ml1000ml实验步骤.酶液提取称取新鲜植物叶片或其它组织置于研钵中，加入下预冷

10.5g,2〜3ml4℃的磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后，转入容量瓶中,并用缓冲液冲研钵pH

7.025ml数次，合并冲洗液，并定容到刻度混合均匀，将容量瓶置冰箱中静置取上清5c lOmin,液在下离心上清液即为过氧化氢粗提液下保存备用4000r/min15min,,5℃.测定试管支，其中支为样品测定管，支为空白管，按表顺序加入试210ml3211-1剂预热后，逐管加入的每加完管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中,25℃H2O2,1260nm下测定吸光度，每隔Imin读数1次，共测4min,待3支管全部测完后，按式（1-1）计算酶活性表紫外吸收法测样品测定液配制表1-1H2O2管号S2空白S1SO粗酶液（）

0.

40.

40.4（失活酶液）

0.4（磷酸缓冲液）mlPH

7.8磷酸缓冲液（ml）

3.

03.

03.

03.0蒸储水（）

2.

02.

02.

02.0ml.结果计算以内减少的酶量为个酶活单位（口）3Imin A

2400.11过氧化氢酶活性（U.gmin）=△A24o*Vt/（O.l*Vi*t*FW）（1-1）式中（）A A240:AsO-Asl+As2/2;:加入失活酶液的对照管吸光值；AsO样品管吸光值；Asl,As2Vt:粗酶提取液总体积（ml）；VI:测定用粗酶提取液体积（ml）；FW:样品鲜重（g）；每下降为个酶活单位（）；

0.1:A

2400.11ut:过氧化氢到最后一次读数时间（min）。