《免疫学实验技术》实验讲义修订版20xx

《免疫学实验技术》实验讲义修订版20xx亲们曾老师发来的实验讲义，请下载打印，每次课带相应的讲义.下周一实验点开始，切记时间不要迟到哟

11.作业第一次（今天）的实验报告，还有“大吞噬〃和小吞噬的2图.漂亮美女们要把头发扎好，为自己的健康着想哟3实验一小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验【原理】吞噬细胞具有对异物（细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等）吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用【目的】通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞

1.吞噬作用的过程及其意义.掌握小鼠腹腔注射给药和摘眼球放血及脊椎脱臼处死的方法2【材料】小鼠、鸡（）、尖吸管、玻片、瑞氏染液、2%RBC CRBC眼科剪、弯头眼科银、注射器1mL【方法】的硫乙醇酸钠溶液腹腔注射（诱导腹腔巨噬细胞10%1ml大量渗出））腹腔注射4d2%CRBC1ml）45min轻揉腹部,剪开表皮，暴露腹膜，剪一小口，取腹腔液（用尖吸lmin管）滴于玻片一端推片（自然干燥）瑞氏染色（）lOmin冲洗，印干，镜检【注意事项】.腹腔注射时勿注入皮下；1染色时玻片勿互相碰触；

2.观察时注意玻片正反面

3.结果吞噬百分率二吞有的吞噬细胞个吞噬细胞吞SRBC/100xlOO%噬指数=所吞数个吞噬细胞附SRBC/100悬液的制备吸取在阿氏液中保存的沉

1.2%CRBC CRBC淀

0.3mL,置于玻璃试管内，加入生理盐水,混匀，2mL2000rpm,离心，此为洗涤红细胞离心毕，观察上清，如无溶血现象，即5min可弃上清，取红细胞沉淀（即为压积红细胞）移入离心管中，

0.2mL,15mL以注射器吸取生理盐水加入，混匀,即为10mL10mL悬液若洗一次后仍可见溶血现象，则重复第一步，直至无溶血2%CRBC发生，方可配制实验用红细胞悬液.摘取胸腺，脾脏均为重要的免疫器官，做动物实验获取免疫细胞2的重要来源示教片大吞噬实验即本实验结果；小吞噬实验外周血嗜中性粒细胞吞噬葡萄球菌（标本片示教）实验二淋巴细胞转化实验（法）MTT

一、原理四甲基偶氯嗖盐（）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物当有MTT活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的还原成紫兰色的MTT甲膻，将结晶的甲膻溶解释放后，可根据所测的值反映活细胞的数量OD和活性，从而推知待测样品的水平

二、材料小鼠、鼠板、眼科剪、眼科银、乙醇湿棉球、小平皿、目筛网、75%200（研棒（注射器针芯）、细胞计数板、盖玻片、加样器、、）1mL200uL20uL及枪头、孔血凝板、离心管、管、孔板、白细胞计数9615mL4mL EP96液、、、无菌、完全（含、MTT ConAPBS Tris-NH4Ck164010%FBS双抗）、无菌针头过滤器、注射器、废物1%

0.01N HCI-10%SDS10mLs（液）缸、冰浴、无菌操作台、培养箱，显微镜、酶标仪，冰箱、低CO2温离心机试剂的准备:称取的溶于后，终浓度为

1.MTT50mg MTT,10ml PBS过滤除菌，无菌管分装，管，避光保存5mg/ml,EP1mL/-2CTC，/瓶出品取溶于中,

2.ConA:25mg Sigma25mg,25mLPBS终浓度为过滤除菌，无菌管分装，管，保存用Img/mL,EP1mL/-2CTC时取以无菌稀释为（即稀释倍）1mL,PBS100ug/mL10，:取市售配好的粉末一袋加蒸储水,混匀,

3.PBS PBS1000mL高压或过滤除菌，（保存4。