详细方案解决单细胞样本测序芯片使用

详细方案解决单细胞样本测序芯片使详细方案解决单细胞样本测序芯片使用近年来研究者认识到肿瘤细胞异质性的存在，继续使用之前的做法一一将整个肿瘤组织作为一个样本进行研究，并不能正确的揭示出肿瘤组织中细胞内基因的变化同样，在动物胚胎发育和植物分生组织研究中，单细胞或者微量细胞也是最重要和最关键的样本类型因此，激光显微切割和单细胞分选技术被大量的应用在这些LCM研究中可是，如何将显微切割或细胞分选得到的少量甚至单细胞有效的应用在下游研究中，是研究者面临的重大挑战年，等提出了法，将经过体外1990Van GelderEberwine cDNAT7转录系统合成即最经典的线性扩增方法在此之后，很aRNA,RNA多非常优秀的学者基于法研究出多种不同的扩增方法Eberwine RNA基于法的线性扩增使用量噬菌体的强启动子，对真核生物Eberwine的序列没有偏好，因此扩增产物能够非常好地保持原始转录mRNA本中的丰度，具有非常高的保真度mRNA Epicentrean illumina利用其著名的体外转录体系，对技术进行了company T7Eberwine改良基于改良技术，提供了多个系列的扩增产品，适用于单RNA细胞样本或者微量样本RNA第一链合成.

1.cDNA使用引物T7-OligodT.第二链合成.2cDNA杂交产物中的被消化成片段后，cDNA:RNA RNARNase HRNA合成为第二链无需纯化cDNA.体外转录合成3aRNA.带有转录启动子并具有方向性的双链经体外转录后生产T7cDNAaRNA纯化

4.aRNA.的全部扩增步骤为上述步.TargetAmp1-round1-4需要继续进行以下步.TargetAmp2-round5-

8.第二轮的第一链合成.5cDNA经第一轮合成并纯化得到的经逆转录合成第一链使用RNA cDNA,随机引物..第二轮的第二链合成.6cDNA杂交产物中的被消化成片段使cDNA:RNA RNARNase HRNA用引物合成T7-OligodT cDNAo.体外转录合成7aRNA Aminoally1-aRNA.纯化扩增过程完成

8.aRNA,TargetAmp2-round技术在芯片和测序中的应用文献Target Amp，”

1.Takacs,E.M・,et al.Ontogeny ofthe MaizeShoot ApicalMeristem.PLANT CELL24,3219-3234该研究经过对玉米的晶胚顶端区域和幼苗进行显微切割后，进行转录组测序对的个体发生学进行分析SAMTotal RNAisolated fromthe microdissectedcells wassubjected totworounds oflinear amplificationto generatemicrogram quantitiesof RNAamenableto RNA-seq analysesreviewed inBrooks et al.,.AmplifiedRNA wasused toconstruct cDNAlibraries andIlluminabased RNA-seqgenerated atotal of130million44-bp sequencereads thatwere alignedtothe maizegenome seeMethods;Schnable etaL,.”

2.Yang,F.，et al.Laser microdissectionand microarrayanalysis ofbreasttumors revealER-alpha relatedgenes andpathways.Oncogene25,1413-9该研究经过技术分离乳癌组织的上皮细胞，利用LCM Affymetrix芯片对基因表示情况进行了分析对扩增在芯片中的Hu133A RNA应用进行了论证，并给予了高度认可“Therefore,our resultagrees withthepublished studiesthat tworounds ofT7-based RNAamplificationaccurately preservethe mRNAabundance inthe RNAsamples,and thecombinationof LCMand RNAamplification isa reliableapproach forgeneexpression profiling

3.Fragouli,E・,etal.Transcriptomic profilingof humanoocytes:association ofmeiotic aneuploidyand alteredoocyte geneexpression.Mol.该研究对不同病人的卵母细胞中基因表示Hum.Reprod.16,570-5826差异进行了深入的分析。