2024年矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞MMP

年矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞2024MMP矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞MMP作者王海涛，刘昊，颜京霞，田艳霞，江小华，高俊玲肺间质纤维化Expression ofmatrix metalloproteinase2and9in pulmonaryfibroblasts ofsilicoticfibrosis ratmodelAIM:To studythe expressionof MMP2and MMP9in fibroblastsof ratsilicoticfibrosis modeland itssignificance.METHODS:Fifty pathogenfreeWistar ratswererandomly dividedinto experimentalgroup andcontrol group.Experimental groupwasinstillated withSiO2,while control group withnormal saline.Pulmonary interstitialfibroblastswere isolatedon day1,3,7,14and28after SiO2exposure.The proteinandmRNA expressionof MMP2was evaluatedby immunocytochemistryand RTPCR.

①RESULTS:The MMP2protein expressionin fibroblastsincreased on day1after SiO2exposure andreached

3.887times t=

23.667,Plt;

0.001that of controlgroupon day

7.The expressionof MMP9protein alsoincreased onday1after SiO2exposure andreached

②

3.103times thatofcontrolgroup t=

11.399,Plt;

0.001onday

7.The mRNAexpressionof MMP2and MMP9was enhancedin fibroblastsat24h afterSiO2instillation.CONCLUSION:The expressionof MMP2and MMP9in fibroblastsis upregulatedin silicoticfibrosismodel.matrix metalloproteinase;fibroblast cells;pulmonary fibrosis;silicotic fibrosis目的才深讨肺间质成纤维细胞和在致肺纤维化中的表达及意义.方法:清MMP2MMP9SiO2洁级大鼠只，随机分为对照组和实验组，实验组气管内注射悬液，对照组代以等Wistar50SiO2剂量生理盐水.注射后和分离和提取肺间质成纤维细胞，应用免疫细胞化学和逆转1,3,7,1428d录多聚酶链式反应方法,观察其蛋白及其的动态变化.结RTPCRMMP2,MMP9mRNA，，果:

①作用后成纤维细胞表达增高达高峰为对照组的倍SiO21d MMP27d

3.887t=

23.667,在作用后表达增高，达对照组的倍Plt;

0.001;MMP9SiO21d7d

3.103t=

11.399,

②和的转录从作用后就开始升高.结论:受Plt;

0.001;MMP2mRNA MMP9mRNA SiO21d刺激后，肺间质成纤维细胞上调和的表达，损伤肺泡基底膜，启动肺纤维化的SiO2MMP2MMP9发生.基质金属蛋白酶；肺间质成纤维细胞；肺间质纤维化；矽肺引言0基质金属蛋白酶及其组织抑制物matrix metalloproteinaseand tissueinhibitor ofmatrix是肺纤维化效应细胞分泌的生物活性分子，在细胞外基质metalloproteinase,MMP/TIMP的合成^降解中具有重要意义.在家族中，和的特extracellular matrix,ECM MMPMMP2MMP9异性底物主要是型胶原，而后者是肺泡壁基底膜的重要成分.肺泡上皮细胞和基底膜的损伤副市间IV质纤维化过程的关键事件[我们在所致肺纤维化形成过程中的不同阶段分离肺成纤维细胞1].Si02,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应对和lung fibroblast,LFbRTPCRMMP2MMP9蛋白及其进行探讨如下.mRNA和方法1材料

1.1健康雄性大鼠，体质量由华北煤炭院医学实验动物中心提供.粉尘中国SD180±40g,Si02医学科学院劳卫所；小鼠抗波形蛋白及免疫组化染色试剂盒武汉博士德vimentinmAb SABC生物工程有限公司；羊抗和羊抗多克隆抗体MMP2MMP9Santa Cruz；产品；免疫组化试剂盒北京中山生物技术有限公司试剂盒公司产品；逆转SP TrizolGibco录反应试剂氯公司产品扩增试剂盒和梯度公司；弓物由Takara;PCR DNAMarkert SangonI公司合成纯化.弓|物序歹」为Sangon,PAGE MMP2I5CTA TTCTGT CAGCAC TTTGG3,扩增片段长度为sense,5CAG ACTTTG GTTCTC CAACTT3antisense303bp.MMP9引物序列为5AAA TGTGGG TGTACA CAGGC3sense,5TTC ACCCGG TTGTGG AAA扩增片段长度为内参照采用，引物序列为CT3antisense303bp.GAPDH5CTT CTGAGT GGC扩增片段长度为AGT GATGG3sense,5TGG CACAGT CAAGGC TGAGA3antisense,389bp.方法

1.2大鼠只，随机等分为实验组和对照组.实验组大鼠乙醛麻醉后,采用经气管染粉尘法复50SiO2制矽肺模型[粉尘悬液生理盐水配制，每只大鼠对照组在相同条件下气管内2].SiO250g/L,1mL.注入生理盐水染尘后分别处死实验组和对照组各只，无菌操作取肺.采用1mL.1,3,7,14,28d5酶消化法结合组织块贴壁培养法分离和培养细胞.用法检测细胞的波形蛋白的表SABC vimentin达，以鉴定分离培养的细胞为肺间质成纤维细胞.免疫细胞化学检测和将第代接种于载玻片上，贴壁后，血清饥饿使其同MMP2MMP94LFb步化，按照试剂盒说明，作细胞爬片的免疫细胞化学染色.羊抗鼠抗和羊抗鼠一SP MMP2-MMP9抗稀释.显色.代替一抗作阴性对照.染色结果经数码医学图像分析1:150DAB PBSMotic Med

6.0系统北航作图像分析，胞质中的棕褐色颗粒为表达阳性，表达强度用积分吸光度表示.A检测和按照试剂盒说明提取细胞总逆转录

1.

2.2RTPCR MMP2MMP9mRNA TrizolRNA.，℃步骤参照说明书进行反应条件扩增反应步骤参照说明书，反应42P15min,952min;PCR℃℃℃条件个循环.扩增产物进行琼脂94,45s;5845s;72,80s;3015g/L,糖凝胶电泳.电泳条带采用凝胶成像系统做积分吸光度值测定，以实验组和对照组A MMP2,MMP9与的比值的表示的相对表达量.GAPDH AMMP2mRNA学处理数据以表示，用统计软件包进行组间,方差不齐时用检验.x±s SPSS

11.0t t结果2和的表达矽肺模型组大鼠和表达比对照组明显增强，

2.1MMP2MMP9LFb MMP2MMP9为表达高峰,表肺间质成纤维细胞蛋白及表达的动态变7d Tabl Fig11MMP2MMP9mRNAz Z化略和的变化模型组和表达与对照组比较

3.2MMP2MMP9mRNA LFbMMP2MMP9mRNA明显增高Tab

1.讨论3长期吸入粉尘引起的矽肺，其主要病理改变是矽结节形成和间质纤维化，但其发病机制尚SiO2未完全阐明.目前认为，吸入粉尘后肺泡巨噬细胞、中性粒细胞等分泌多种细胞因子，导致肺SiO2泡炎的发生发展，最终引起进行性肺间质纤维化.纤维化的发生是细胞外基质合成与降解不平衡的结果.近年来，细胞外基质降解系统尤其是基质金属蛋白酶及其组织抑制因子功能紊乱,在纤维化疾病中愈来愈受到重视.研究表明，基质金属蛋白酶在细胞外基质的降解与重塑的病理生理发展过程中起关键性作用.和的特异性底物是型胶原，而后者是肺泡壁基底膜的重要成分.由致病MMP2MMP9IV因素引起的高表达在破坏肺泡上皮细胞基底膜继而纤维母细胞侵入肺泡腔引起肺纤维MMPZMMP9化中起作用动物实验和临床均表明，在肺纤维化中有和的高表达[

[3].MMP2MMP94].本结果显示，注入粉尘后蛋白表达即显著升高，达到对照组的倍SiO21d MMP

21.245，达到高峰为对照组的倍仍显著高t=

2.660,Plt;

0.05,7d

3.

88723.667,Plt;

0.01,28d于对照组其表达亦明显增高.及其表达和对照组比较在t=

5.621,Plt;

0.

01.mRNA MMP9mRNA显著升高.提示在肺间质纤维化早中期，肺间质成纤维细胞是1,3,7d和来源之一.肺间质成纤维细胞可能通过高表达和，启动了介于炎症MMP2MMP9MMP2MMP9细胞之间、炎症细胞与肺组织结构细胞之间以及细胞与细胞外基质之间持续进行性发展的研究表明，在肺纤维化模型中肺间质成纤维细胞可以高表达亦有cross talking”

[5].MMP2,学者对肺纤维化患者的肺成纤维细胞进行体外培养，亦发现其具有显著增高的表达[.可见，MMP96]肺间质成纤维细胞不单纯是肺纤维化的效应细胞.注入粉尘后,肺间质成纤维细胞通过表达Si02和,参与肺泡基底膜的损伤，从而参与启动肺纤维化.MMP2MMP9

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