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恶性胸腔积液患者淋巴细胞亚群的改变意义T恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的改变意义作者王英禹，张瑞，张志培，周勇安，孙晓雁【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；CD4；CD8ValueofmeasurementofTlymphocytesubsetsinpatientswithmalignantpleuraleffusions【Abstract]AIM:TomeasureTlymphocytesubsetsTLS inperipheralbloodPBandpleuraleffusionPEinpatientswithmalignantpleuraleffusionsMPEandtostudythechangesofTLSinPBandPEinpatientswithMPEbeforeandafterchemotherapy.METHODS:ThelevelsofTLSinPBandPEinpatientswithMPEorbenignpleuraleffusionBPEandinPBofnormalpersonwereexaminedandcompared;ThelevelsofTLSinPBandPEwerealsocomparedbeforeandafterchemotherapy.RESULTS:ThedistributionofTLSwassimilarinPBandPEinpatientswithMPE;thelevelofCD8+TcellinPBofpatientswithMPEwashigherthanthatinnormalperson
30.
62.4vs
20.
91.8,Pit;
0.05,buttherat ioofCD4+/CD8+waslowerthanthat innormalperson
1.
780.21vs
2.
710.35,Pit;
0.05,andthelevelofCD4+Tcellwassimilarwiththenormal;comparedwi thBPEpatients,MPEoneshadlowerlevelofCD4+TcellandratioofCD4+/CD8+Pit;
0.05,buthigherlevelofCDS+TcellintheirPBandPEPit;
0.05;chemotherapycoulddepressCD8+Tcell
30.
62.4vs
24.
72.3,
31.
62.4vs
21.
94.1,Pit;
0.05andelevatetheratioofCD4+/CD8+
1.
780.21vs
2.
190.19,
1.
690.30vs
2.
620.40,Pit;
0.05inPBandPEinpatientswithMPE.CONCLUSION:ThelevelofTLSinPEcanbeknownbymeasuringitinPB;itishelpfultomeasurethelevelofTLSinPBandPEfordistinguishingMPEfromBPE;cellmediatedimmunitydepressioninMPEcanbepartlyamelioratedbychemotherapy.[Keywords]pleuraleffusion；Tlymphocyte；CD4；CD8【摘要】目的探讨检测恶性胸腔积液MPE患者外周血PB和胸水PE中T淋巴细胞亚群TLS的意义及化疗前后TLS的改变.方法对比良性胸腔积液BPE、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平；对比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平；对比MPE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的水平.结果:TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相像；MPE患者外周血中CD8+T细胞水平高于正常人
30.
62.4Vs
20.
91.8,Pit;
0.05,CD4+T细胞相仿，CD4+/CD8+低于正常L
780.21vs
2.
710.35,Pit;
0.05）；与BPE患者相比，MPE患者外周血和胸水中CD4+T细胞、CD4+/CD8+较低（Pit;
0.05）,而CD8+T细胞较高（Pit;
0.05）；化疗后MPE患者外周血和胸水中CD8+T细胞水平明显降低（
30.
62.4Vs
24.
72.3,
31.
62.4vs
21.
94.1,Pit;
0.05）,CD4+/CD8+明显升高（
1.
780.21vs
2.
190.19,
1.
690.30vs
2.
620.40,Pit;
0.05）.结论检测外周血可以了解胸水中TLS水平；检测外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鉴别；化疗可部分改善MPE患者的细胞免疫抑制状态.【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；CD4；CD80引言肿瘤的发生、发展与细胞免疫功能降低亲密相关，T淋巴细胞在其中起中心调控作用
[1].为比较良性胸腔积液（benignpleuraleffusion,BPE）和恶性胸腔积液（malignantpleuraleffusion,MPE）患者的T淋巴细胞亚群（TLS）分布水平及对原发病的诊断价值，和化疗对其影响，我们选择BPE,MPE患者的胸腔积液和外周血及正常健康人外周血进行TLS检测.1对象和方法
1.1对象诊断明确MPE32（男21,女11）例，平均年龄
57.9岁，鳞腺癌4例，腺癌28例；BPE（结核性）29（男17,女12）例，平均年龄
45.7岁；正常比照组选自体检合格、肝、肾、肺功能完全正常健康人27（男14,女13）例,平均年龄
34.2岁.患者于治疗前行胸腔穿刺术，收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.MP患者经NP方案化疗2个周期后（盖诺25mg/m2ivdl,d8；DDP4050mgdl3,21d为一〜〜周期），收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.采集体检正常健康人静脉血10mL.
1.2方法胸腔积液用200m尼龙网过滤组织于离心管；加入5mLRPMI；18℃,200g离心lOmin,去除上清液，混悬细胞沉淀于20mLRPMI,重复离心1次，重混悬细胞沉淀于5mLRPMI,加入PBS冲洗细胞，室温下，200g离心lOmin,去除上清液.重复此步骤.混悬细胞沉淀于适量RPMI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.将肝素化的簇新去红细胞混悬液室温下加入等量PBS混匀，每10mL去红细胞混悬液/PBS混悬液中加入3mLFicollHypaque液.18℃,900g,离心30min.移除上层的血浆和血小板，缓慢的转移中层的单个核细胞层到锥形管，用3倍体积的HBSS洗涤细胞，18℃,490g,离心lOmin.去除上清液.用HBSS重新混匀细胞、洗涤并离心1次，去除上清液.混悬细胞于RPMI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.计数外周血和胸腔积液淋巴细胞，用RPMI调整细胞度至
2.5109/L,将106淋巴细胞悬于lOOLHanks缓冲液含lg/L牛血清蛋白、
0.Ig/L叠氮钠中，分别与20L抗CD3APCUCHT
1、抗CD4FITCRPAT4及抗CD8CychromeRPAT8mAb或相应IgG比照蛋白均购自美国BDPharmingen公司于4℃孵化30min,Hanks缓冲液洗涤2次，5g/L多聚甲醛固定.24h内用FACStarPlus流式细胞仪检测CD3,CD4,CD8细胞，计算CD4/CD8比值.统计学处理用SPSS
10.0统计软件，数据以xsx表示.组间比较用MannWhitneyU检验.组内前后比较用Wilcoxonsignedrank检验.2结果
2.IT细胞亚群的差异MPE患者外周血PB CD3+,CD8+T细胞高于正常人比照组Pit;
0.05,CD4+T细胞相仿Pgt;
0.05,CD4+/CD8+低于正常人比照组Pit;
0.05；BPE患者PBCD3+,CD4+,CD8+均高于正常人比照组比照；
0.05,CD4+/CD8+相仿Pgt;
0.
05.BPE,MPE患者PBCD3+T细胞相仿Pgt;
0.05,前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T细胞低于后者Pit;
0.
05.BPE,MPE中CD3+T细胞相仿Pit;
0.05,前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者,而CD8+T细胞低于后者Pit;
0.
05.患者外周血和PE中TLS分布相像Pgt;
0.05表
1.
2.2化疗后TLS的改变MPE患者化疗前、后PB和PE中CD3+,CD4+T细胞无明显改变Pgt;
0.05,而CD8+T细胞明显降低,CD4+/CD8+明显上升Pit;
0.05,表
2.表1胸腔积液患者/正常人T细胞亚群略表2恶性胸腔积液患者化疗后T细胞亚群改变改变略3探讨MPE患者外周血CD3+,CD8+T细胞百分率明显高于健康人，CD4+细胞无明显差异，CD4+/CD8+比值明显低于健康人.提示MPECD4+/CD8+比值降低是由于CD8+细胞增高所导致，反映了MPE患者的细胞免疫功能处于抑制状态.而BPECD3+,CD4+,CD8+T细胞百分率均高于健康人，CD4+/CD8+比值无明显差异，反映了BPE患者的细胞免疫功能处于激活状态.在外周血和胸腔积液中，两者的CD3+T细胞百分率相像，但MPE患者的CD4+T细胞百分率、CD4+/CD8+比值低于BPE患者，CD8+T细胞百分率高于BPE患者.提示检测外周血或胸腔积液中TLS,有助于临床上对BPE,MPE患者的鉴别诊断.MPE患者的外周血和胸腔积液中CD3+,CD4+,CD8+TLS百分率和CD4+/CD8+比值均相像，说明胸腔积液和外周血的分布水平特别接近，T细胞释放到外周血和安排到胸膜腔的水平有关，通过外周血TLS的检测可反映出胸腔积液T淋巴细胞水平.化疗后CD8+T细胞明显降低，CD4+/CD8+明显上升，而CD3+,CD4+T细胞无明显改变.提示常规化疗后肿瘤细胞大量坏死或凋亡，肿瘤负荷削减而使免疫抑制因子削减，可部分改善患者的细胞免疫抑制状态，但细胞免疫功能紊乱并未得到完全订正.CD4+T细胞Th可分泌IL2,TIFN等细胞因子，并诱导或促进自然杀伤NK细胞等多种细胞毒性细胞的活性，共同发挥抗肿瘤作用
[2].CD8+T细胞Ts则抑制机体的免疫功能，与肿瘤的发生、发展和转移亲密相关.恶性胸腔积液患者肿瘤细胞负荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴细胞增殖、分化过程中造成Ts,Th细胞水平的增、减，以有利于肿瘤在宿主的转移
[3].因此,细胞比值是反映细胞免疫平衡状态的敏感性指标，本探讨结果提示恶性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下、紊乱；T淋巴细胞亚群的测定对恶性胸腔积液的诊断及疗效评估有肯定价值；外周血中T淋巴细胞的检测可以反映胸腔积液中T淋巴细胞分布水平.并提示在有效化疗杀伤癌细胞的同时，应协助以免疫调整治疗，从而提高患者的细胞免疫功能，更有利于延长患者的生存期并改善其生存质量[4-5].【参考文献】
[1]萧剑军，何洁冰，何庭宇，等.中晚期肺癌患者T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能检测及临床意义[J].广东医学院学报，2002,20115-16,
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1044.。
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