还剩22页未读，继续阅读
本资源只提供10页预览，全部文档请下载后查看！喜欢就下载吧，查找使用更方便
文本内容:
细菌内毒素检验方法验证方案1概述:为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格保证用药安全确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证2验证目的:为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证3验证方式:结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求4验证范围:适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行5验证结果的评价:根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求适用性是否理想6验证机构组成
6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告
6.2验证委员会组成姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责
6.4职责
6.
4.1验证委员会结果判断当入C在
0.5入，2人（包括
0.5人和2人）时判定该批赏试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查同时可以进入下一步验证检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要是？否？求检查人确认人日期日期
10.
3.
2.
5.1邕试剂灵敏度复合试验三次验证试验结果评价如下表验证试验结果一次二次三次结果计算X c=Ac=X c=结论确认结果是否符合要求:是？否？检查人；确认人日期日期
10.
3.3干扰试验预实验同法操作检查三次试验记录试验结果进行对比目的初步确定供试品的最大不干扰浓度或最小稀释倍数为正式干扰试验提供依据是检验在某一浓度下的供试品对于赏试剂与内毒素的反应有无干扰作用使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过所使用的赏试剂的最大有效稀释倍数的溶液
10.
3.
3.1将内毒素检查阴性的供试品进行一系列倍数稀释，但最大的的稀释倍数不得超过MVD=CL/入（人为现在市面最高灵敏度，这里选公司能买到的最高灵敏度）
10.
3.
3.2使用赏试剂对每一稀释倍数进行检验每一稀释倍数下做2只供试品管和2只供试品阳性对照（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2人浓度）另取2只加入细菌内毒素检查用水做为阴性对照，2只加入2人浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照供试品阳性对照溶液的制备举例制备稀释4倍的供试品阳性对照液方法，取
0.3ml浓度为
4.0X EU/ml的内毒素标准溶液+
0.3ml稀释倍数为2的供试品稀释液一一制得
0.6ml含2X EU/ml内毒素标准液的稀释倍数为4的供试品稀释液保温（60min）2min后观察，并记录结果
10.
3.
3.3当阴性对照为阴性阳性对照为阳性时试验有效当系列浓度中出现供试品溶液2管为阴性，供试品阳性对照2管为阳性时认为供试品在该浓度下不干扰试验，此稀释倍数即为最小不干扰倍数，即可选择该稀释倍数进行正式干扰试验当系列浓度中所有浓度的供试品管都不为阴性，或供试品阳性对照管不为阳性时，说明该供试品对内毒素与邕试剂的反应村子啊存在干扰，则应对供试品进行更大倍数的稀释（不得超过MVD,）或者通过其他方式排出干扰为确保所选则的处理方法能不有效的排出干扰且不会是内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素在经过处理的供试品溶液进行干扰试验当供试品的内毒素限值单位为,，，，，或,，，，时应将做小不干扰稀释倍数换算成最大不干浓度（即该稀释倍数下溶液的浓度）以,，，，，或,，，，表示
10.
3.
3.,这里干扰试验预试验用注射用水来检查试验注射用水限值为含内毒素量不得过
0.125EU按,，，，，，，入计算出灵敏度为
0.03EU/ml下的MVD值将供试品溶液稀释一系列进行检验，用灵敏度为
0.25EU/ml的赏试剂进行试验试验结果如下表第一次稀释倍数原液倍倍倍观察供试品溶液+或一观察供试品阳性对照+或一第二次稀释倍数观察供试品溶液+或--观察供试品阳性对照+或一观察供试品溶液+或一观察供试品阳性对照+或一结论确认结果是否符合要求:是？否？检查人；确认人日期日期结论确认结果是否符合要求:是？否？
10.
3.4干扰试验目的是检验某一浓度下的供试品对于邕试剂与内毒素的反应物干扰作用试验重复三次
10.
3.
4.
1.操作方法
10.
3.
4.
1.L制备内毒素标准对照溶液取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2人、入、
0.5入、
0.25X（方法同
10.
3.
2.
2.1）
10.
3.
4.
1.2制备含内毒素的供试品溶液:将供试品稀释至预实验中确定的不干扰稀释倍0数，入、入、
0.5入、再用此稀释液将
10.
3.
3.
1.1中的同支细菌内毒素标准品稀释成4个浓度即
20.25人的含内毒素的供试品溶液这里以注射用水来进行试验
10.
3.
4.
1.3赏试剂的准备:取规格为
0.1ml/支的邕试剂36支，轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内每支加入
0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡
10.
3.
4.
1.4加样将准备好的邕试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支僧），1列2支（管）其中的4支4列每列每支分别加入
0.1ml的
2.0入、
1.0入、
0.5入、
0.25X的内毒素标准溶液，另一列2支（管）加入
0.1ml检查用水作为阴性对照将另外18支（管）邕试剂放在试管架上，排成5歹1],4列4支（管），1列2支（管）其中的4支4列每列每支分别加入
0.1ml的含
2.0人、
1.0入、
0.5入、
0.25X的内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入
0.1ml供试品溶液作为样品阴性对照加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入371水浴或适宜恒温器中，保温602分钟后，观察并记录结果
10.
3.
4.2实验结果计算如两组最大浓度
2.0人均为阳性，最低浓度
0.25人均为阴性，阴性对照，管均为阴性时，按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（Es）和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（Et）.Es=lg-1（Xs/4）Et=lg-1（Xt/4）Xs、Xt分别为用检查用水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（1g）
10.
3.
4.3结果判断
10.
3.
4.
3.
1.判断标准当Es在
0.5入，
2.0人（包括
0.5人和
2.0入）时,且Et在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时,则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查当Et不在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时、则认为供试品在该浓度下干扰实验
10.
3.
4.
3.
2.判断结果
10.
3.
4.4干扰试验验证结果如下表干扰试验验证结果第一次检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效规格价赏试剂EU/ml细菌内毒EU/支素标准品细菌内毒EU/ml素检查用水反应结果保温时间（，）序号内毒素标结果阴性内毒素的结果阴性准溶液打
（一）阳供试品溶打
（一）阳性打（+）液性打（+）加入内毒2人1素标准品2浓度EU/ml3与供试品4内毒素溶入1液（稀释倍2数）
340.5X
12340.25X1234阴性对照12T结果计算Es=lg（Xs/4）=-lEt=lg（Xt/4）=结果判断当Es在
0.5入，
2.0入（包括
0.5人和
2.0入）时，且Et在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查当Et不在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时，则认为供试品在该浓度下干扰实验检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要求是？否？检查人；确认人日期日期干扰试验验证结果第二次检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效规格价邕试剂EU/ml细菌内毒EU/支素标准品细菌内毒EU/ml素检查用水反应结果保温时间（，）序号内毒素标结果阴性内毒素的结果阴性准溶液打
（一）阳供试品溶打
（一）阳性打（+）液性打（+）加入内毒2入1素标准品2浓度EU/ml3与供试品4内毒素溶入1液（稀释倍2数）
340.5X
12340.25X1234阴性对照12T结果计算Es=lg（Xs/4）=-lEt=lg（Xt/4）=结果判断当Es在
0.5入，
2.0人（包括
0.5人和
2.0入）时，口Et在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查当Et不在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时，则认为供试品在该浓度下干扰实验检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要求是？否？检查人；确认人日期日期干扰试验验证结果第三次检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效规格价邕试剂EU/ml细菌内毒EU/支素标准品细菌内毒EU/ml素检查用水反应结果保温时间（，）序号内毒素标结果阴性内毒素的结果阴性准溶液打
（一）阳供试品溶打
（一）阳性打（+）液性打（+）加入内毒2入1素标准品2浓度EU/ml3与供试品4内毒素溶入1液（稀释倍2数）
340.5X
12340.25X1234阴性对照12T结果计算Es=lg（Xs/4）=-lEt=lg（Xt/4）=结果判断当Es在
0.5入，
2.0入（包括
0.5人和
2.0入）时，且Et在
0.5Es,
2.OEs（包括
0.5Es和
2.OEs）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查当Et不在
0.5Es,
2.OEs包括
0.5Es和
2.0Es时，则认为供试品在该浓度下干扰实验检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要求是？否？检查人；确认人日期日期NC,2支加入
0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管PPC o
10.
3.
4.
5.4将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入371水浴或适宜恒温器中，保温602分钟保温和取放试管过程应避免受到振动造成假阴性结果
10.
3.
4.
5.5结果判断
10.
3.
4.
5.6判断标准当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定;如供试品2管均为阳性，应认为不符合规定;如2管中1管为阳性，1管为阴性，按上述方法另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定若第一次实验时供试品的稀释倍数小于MVD而结果出现2管均为阳性或2管中1管为阳性时，按同样方法复试，复试时要求将其稀释至MVD
10.
3.
4.
5.7验证结果如下表第一次供试品名称供试品阳性对照结果阳性对照+阴性对照++---注射用水批号1管2管1管2管1管2管结果是否有效结果判断每1ml中含内毒素量不得过
0.125EU,才符合规定检验人员复核人员日期日期检查人；确认人日期日期第二次供试品名称供试品阳性对照结果阳性对照+阴性对照++---注射用水批号1管2管1管2管1管2管结果是否有效结果判断每1ml中含内毒素量不得过
0.125EU,才符合规定检验人员复核人员日期日期检查人；确认人日期日期第三次供试品名称供试品阳性对照结果阳性对照+阴性对照++---注射用水批号1管2管1管2管1管2管结果是否有效结果判断每1ml中含内毒素量不得过
0.125EU,才符合规定检验人员复核人员日期日期检查人；确认人日期日期11偏差分析序号偏差处理方法
126.
4.
1.1负责验证方案的审批
6.
4.
1.2负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施
6.
4.
1.3负责验证数据及结果的审核
6.
4.
1.4负责发放验证证书
6.
4.2验证小组
6.
4.
2.1负责验证方案的制定和实施
6.
4.
2.2负责验证工作的组织与协调
6.
4.
2.3负责验证数据的收集和结果评定
6.
4.
2.4负责完成验证报告7文件准备和培训
6.1所需文件已准备齐全
7.2培训在确认实施前，依据验证小组通过的方案，对参加验证人员培训，明确分工培训记录培训内容日期培训人接受培训人注射用水细菌内毒素检查方法验证方案8验证进度计划
7.1验证小组提出完整的验证计划，经验证委员会批准后实施，整个验证活动分以下几个阶段完成:从年月日至年月日；培训注射用水细菌内毒素检查方法验证从年月日至年月日；9验证依据参考文献培训内容日期培训人接受培训人注射用水细菌内毒素检查方法验证方案
9.1根据2010版药典附录细菌内毒素检查方法、附录XVHI A中药质量标准分析方法验证指导原则验证方案的编写、实施、结果的评价偏差处理结果是否符合标准要求？是？否检查人确认人时间时间12验证结论13拟定再验证方案及验证周期1当检查方法发生较大变更需再验证；2在日常监测中发现检查法异常，转移等需进行再验证；3当试验条件改变可能影响检查结果时应再验证4再验证时应按照药典附录要求及本方案进行再验证，或根据实际情况修订补充验证方案后进行再验证14验证结果完整性评价1验证小组负责对验证结果进行评审，对验证结果的评审见“验证结果完整性总评价记录”，其包括
1.1验证结果是否有遗漏？L2验证实施过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据、是否经过批准，
1.3验证记录是否完整，
1.4验证结果是否符合标准要求偏差及对偏差的说明是否合理是否需要进一步补充试验？15会签16验证结果最终批准10验证内容
10.1试药与试剂号试剂/试药品名批号/规格备注试齐细菌内毒素工作标准品细菌内毒素检查用水确认结果是否达到标准检查人确认人时间时间
10.2仪器设备
10.
2.1精密仪器及需校验的仪器序号仪器设备品名编号/型号校验时间有效期电子天平电热干燥箱恒温水浴箱水银温度计旋涡混合器确认结果是否达到标准？是？否检查人确认人时间时间
10.
2.2一般工器具序号仪器设备品名编号/型号备注移液管凝集管三角瓶试管试管架洗耳球时钟75%酒精棉剪刀砂轮确认结果是否达到标准？是？否检查人确认人时间时间
10.3注射用水内毒素检查方法验证
10.
3.1实验准备:试验室及人员等条件均满足内毒素试验试验条件
10.
3.
1.
1.玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铝酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馈水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱
10.
3.
1.
2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250,待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素
10.
3.2验证内容具体验证步骤
10.
3.
2.
1.赏试剂灵敏度复核方法验证，同一操作方法操作符合三次，记录结果看结果是否稳定重复性是否良好
10.
3.
2.
2.实验操作
10.
3.
2.
2.
1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2人、入、
0.5入、
0.25人（人为所复核的邕试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟
10.
3.
2.
2.
2.待复核邕试剂的准备取规格为
0.1ml/支的邕试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内每支加瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%入
0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡
10.
3.
2.
2.
3.加样将已充分溶解的待复核邕试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）4支（管）4列每列每支分别加入
0.1ml的2入、入、
0.5入、和
0.25人的内毒素标准溶液;另2支（管）加入
0.1ml检查用水（阴性对照）
10.
3.
2.
2.
4.加样结束后，将赏试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入371水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温602分钟
10.
3.
2.
2.
5.观察并记录结果将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）;未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（,）（备注:保温和拿取试管的过程中应避免受到振荡造成假阴性结果）
10.
3.
2.
3.实验结果计算如最大浓度2入4管均为阳性，最低浓度
0.25人4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为赏试剂灵敏度的复核结果（入c）Ac=lg-1（X/4）式中x为反应终点浓度的对数值（1g）反应终点浓度是系列递减的内毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果的浓度
10.
3.
2.4结果判断
10.
3.
2.
4.1判断标准当入c在
0.5入，2人（包括
0.5X和2人）时判定该批邕试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查，并以入（标示灵敏度）为该批邕试剂的灵敏度
10.
3.2,5邕试剂灵敏度复合试验验证结果如下表第一次验证结果如下表:第一次检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效价规格邕试剂EU/ml细菌内毒素标准品EU/支细菌内毒素检查用水反应结果保温时间
（一一）内毒素浓度EU/ml（稀释序号倍数）2入1234X
12342340.25X1234阴性对1照2结果计算Ac=lg-1（X/4）=结果判断当入c在
0.5入，2入（包括
0.5人和2入）时判定该批赏试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查同时可以进入下一步验证检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要是？否？求检查人确认人日期日期检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效价规格邕试剂EU/ml细菌内毒素标准品EU/支细菌内毒素检查用水反应结果保温时间
（一一）内毒素浓度EU/ml（稀释序号倍数）2入134入
12340.5X
12340.25X1234阴性对1照2结果计算Ac=lg-1X/4=结果判断当入c在
0.5入，2入包括
0.5X和2入时判定该批邕试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查同时可以进入下一步验证检验人员复合人员日期日期确认结果是否符合要是？否？求检查人确认人日期日期验证结果如下表:第三次检验目的检验日期检验依据室温试剂名称生产单位批号灵敏度/效价规格宜试剂EU/ml细菌内毒素标准品EU/支细菌内毒素检查用水反应结果保温时间
（一一）内毒素浓度EU/ml（稀释序号倍数）2入1234入
12340.5X
12340.25X1234阴性对1照2结果计算Ac=lg-1（X/4）=。
个人认证
优秀文档
获得点赞 0
