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ICSDB34备案号:安徽省地方标准DB34/T821-20XX代替DB34/T821-2008动物组织中氯霉素的残留测定一酶联免疫吸附法Determination ofchloramphenicol residuein animaltissuesEnzyme-linked immunosorbentassay（征求意见稿）发布实施20XX-XX-XX20XX-XX-XX安徽省市场监督管理局发布本标准按照『给出的规则起草GB/T
1.2020本标准代替《动物组织中氯霉素的残留测定一酶联免疫吸附法》,除编辑性修改外主DB34/T821-2008要技术变化如下-----修改了——增加了本标准由安徽省兽药饲料监察所提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位安徽省兽药饲料监察所、安徽省水产技术推广总站等本标准起草人许世富本标准年月首次发布，本次为第一次修订20088动物组织中氯霉素的残留测定一酶联免疫吸附法范围1本文件规定了动物肌肉、肝脏、肾脏、尿液、鱼肉、虾肉和禽（鸡、鸭）蛋中氯霉素残留量酶联免疫吸附测定方法本文件适用于动物肌肉、肝脏、肾脏、尿液、鱼肉、虾肉和禽（鸡、鸭）蛋中氯霉素残留量的快速筛选测定规范性引用文件2下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682原理3残留在物组织中的氯霉素经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂后用于酶联免疫测定试样中的氯霉素抗原与包被于微孔板中的氯霉素特异性抗体进行免疫竞争性反应，加入一定量的显色底物和终止液，在处450nm进行吸光度测量，试样中氯霉素的含量与颜色成反比换算后可以获得样本中氯霉素的含量试剂和溶液4除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合的二级水
1.1GB/T6682竞争酶标免疫法氯霉素试剂盒，冰箱中保存
1.22c〜8c微孔板包被有氯霉素抗体
1.
2.1氯霉素标准溶液浓度范围阳、、陷/、
1.
2.20/L
0.02|ig/L
0.06pig/L
0.18gg/L
0.54L
1.62gg/Lo
1.
2.3抗体工作液1瓶（7mL）
1.
2.4酶标记物工作液1瓶（12mL）
1.
2.5浓缩样品稀释液1瓶（10x,30mL）
1.
2.6浓缩洗涤液1瓶（20x,25mL）
1.
2.7底物A液1瓶（7mL）底物液瓶（）
1.
2.8B17mL终止液瓶（）
1.
2.917mL乙酸乙酯
1.3正己烷
4.
44.5样品稀释液取浓缩样品稀释液（
4.
2.5）,用水按19（V/V）稀释，混匀
4.6洗涤工作液取浓缩洗涤液（
4.
2.6）,用水按119（V/V）稀释，混匀
4.7底物A、B混合液分别取底物A液
（427）、底物B液
（428）,按11（V/V）充分混匀，在5min内使用，避免搅拌，避免使用金属容器盛装仪器设备5酶标仪带、（或）滤光片
5.1450nm630nm620nm分析天平感量
5.
20.01g匀浆机
5.3^10000rpmo离心机
5.4^5000rpmo振荡器
5.5冰箱
5.1氮吹仪
5.2微量加样器及配套吸头（单道日回多道叱）
5.32050|iL,lOOgL,50HL〜300试样制备6样品处理
6.1动物肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉、虾肉
6.
1.1动物肌肉、肝脏、肾脏，去筋膜，鱼去鳞去骨去内脏，取皮和肌肉部分，虾去头去壳去肠腺，上述样品切成小块，制成糜状，均质取均质样品，加入乙酸乙酯（）充分涡10000rpm2min,3g±
0.05g6mL
4.3,动室温离心取上层乙酸乙酯层于新的离心管中，水浴中，氮气吹干；2min,4000g lOmin,4mL50℃〜60℃残留物用正己烷（）溶解，充分涡动再加入样品稀释液（）低速涡动2mL
4.410s,1mL
4.5,1min,4000g以上离心完全弃去上层正己烷及中间层杂质，取下层水相进行测定禽（鸡、鸭）蛋5min,50|1L
6.
1.2禽（鸡、鸭）蛋，去壳，将蛋清和蛋黄搅拌均匀，取均质样品，加入乙酸乙酯（）充3g±
0.05g6mL
4.3,分涡动室温离心取上层乙酸乙酯层于新的离心管中，水浴中，氮气吹2min,4000g10min,4mL50℃-60℃干；残留物用2mL正己烷（
4.4）溶解，充分涡动10s,再加入1mL样品稀释液（
4.5）,低速涡动1min,4000g以上离心5min,完全弃去上层正己烷及中间层杂质，取50（1L下层水相进行测定尿液取新鲜样品（冷冻或冷藏样品恢复至室温），加入到去离子水中，涡动混匀；取
0.1mL
0.3mL10s四进行检测50样品贮存
6.2将试样按照测试和备用分别存放于℃条件下保存-20℃〜-16测定步骤
77.1测定在室温20℃〜25c条件下操作，测定之前将试剂盒以及所有试剂在室温（20℃〜25℃）下放置lh-2ho按标准样品和测定样品数量，取孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品
7.2的位置分别在各孔中加入标准品工作液或样品溶液，然后每孔中加入抗体工作液，用盖板膜
7.350HL50PL封板，轻轻振荡酶标板10s,充分混匀，室温下（25±2℃）避光反应30min
7.4揭开盖板膜，倾出板孔中的液体，在所有微孔中加260|1L洗涤工作液（
4.6）,轻轻振荡酶标板15-30s,充分混匀，倾出微孔中的洗涤液，在吸水纸上拍干，彻底清除微孔中的残留液和气泡，重复洗板遍
47.5每孔加100|1L酶标记物工作液（
4.
2.4）,用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板10s,充分混匀，室温下（25±2C）避光反应30min
7.6重复步骤
7.4,每孔加100RL底物A、B混合液（
4.7）,用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板10s,充分混匀，室温下（25±2℃）避光反应15min〜20min
7.77揭开盖板膜，每孔加50piL终止液（
4.
2.9）,轻轻振荡酶标板10s,充分混匀，5min〜30min在450nm、（或）下检测吸光度值630nm620nm结果判定和表述8用获得的标准溶液和试样溶液吸光度值的比值进行计算，见式
（2）式中X——试样中氯霉素的含量，单位为微克/千克（或微克/升）（|jg/kg或（jg/L）；A——试样的相对吸光度值（％）对应的氯霉素的含量，单位为微克/升（|ag/L）;/——试样的稀释倍数；一试样的取样量，单位为克或微升或）计算结果表示到小数点后两位m90^检测方法灵敏度、准确度、精密度9灵敏度
9.1本方法在动物肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉、虾肉、禽（鸡、鸭）蛋中的检测限为
0.02|ig/kg；在动物尿液中的检测限为
0.1|ig/kg准确度
9.2本方法在倍检测限添加浓度水平上的回收率为2~580%~120%精密度
9.3本方法的批内变异系数批间变异系数CV%W10%,CV%W15%其他
1010.1本方法在动物肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉、虾肉、禽（鸡、鸭）蛋中稀释系数为.5；在动物尿液中稀释系数为3本方法为快速测定法，检测结果小于检测限时可判为未检出，大于或等于检测限时，应使用色谱质
10.2谱联用法进行确认吸光值不得低于
10.3Bo
0.8试剂盒可能存在交叉反应，不同品牌的试剂盒，其操作步骤可能略有差别，具体操作步骤可根据试
10.4剂盒使用说明书略作调整。
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