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细胞提取方法pbmcPBMC细胞提取方法引言PBMCPeripheral BloodMononuclear Cells是外周血中的单个核细胞,包括淋巴细胞、单核细胞和NK细胞等,是研究免疫学、血液疾病和感染病原体等领域的重要细胞来源本文将介绍一种常用的PBMC细胞提取方法,旨在为研究者提供一种可行的操作步骤材料与试剂
1.外周血样本新鲜采集的外周血样本推荐使用抗凝剂如EDTA进行处理
2.PBS缓冲液含有2mM EDTA的磷酸盐缓冲液
3.密度梯度离心液:如Ficoll-Paque Pluso步骤
1.收集外周血样本使用适当的采血针和抗凝管收集外周血样本,避免血液污染和凝固
2.加入PBS缓冲液将外周血样本转移到15ml离心管中,每1ml外周血加入2ml预先加热的PBS缓冲液,缓慢混合
3.密度梯度离心将外周血样本缓慢地均匀地加入到15ml离心管中含有密度梯度离心液的管内,避免悬浮注意,加入的体积应不超过离心管的80%然后,轻轻离心管以保持梯度的稳定性
4.离心分层PBMC将离心管置于离心机中,以400g的速度离心30分钟离心后,可以看到形成三个不同的层次上层为透明的血清,中间为白色的PBMC层,底层为红色的红细胞
5.收集PBMC层使用长颈的移液器,小心地收集PBMC层,避免污染或干扰其他层次的细胞将PBMC转移至新的离心管中
6.洗涤PBMC向PBMC悬浮液中加入PBS缓冲液,并以1000g的速度离心10分钟倒掉上清,避免损失PBMC重复此步骤两次以彻底洗涤PBMCO
7.计数和保存PBMC使用细胞计数板或自动细胞计数器计数PBMC的数量,根据实验需求调整细胞浓度根据实验需要,将PBMC悬浮液分装到冻存管中,添加适当的冻存液,迅速冷冻保存结论PBMC细胞提取是一种常用的实验操作步骤,通过密度梯度离心的方法,可以有效地从外周血中分离出PBMC这种方法简单易行,不需要复杂的设备和试剂通过掌握并灵活应用这一方法,研究者可以获取大量的PBMC样本,用于免疫学和感染病原体等领域的研究工作当然,不同实验目的和需求可能需要对该方法进行适当的修改和优化,以获得更好的实验结果。