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血糖定量测定Folin-Wu法Folin-Wu法是一种常用的血糖定量测定方法,其原理是基于铜离子Cu2+与葡萄糖在碱性条件下生成的氧化亚铜Cu0的颜色反应来定量测定血糖浓度下面将2详细介绍该方法
一、实验原理Folin-Wu法是一种双试剂显色反应,通过加入铜离子和碱性溶液,使葡萄糖与铜离子反应生成氧化亚铜沉淀,再根据沉淀的颜色变化进行定量测定具体反应过程如下
1.在碱性条件下,葡萄糖的醛基被氧化成装基,生成葡萄糖酸盐
2.铜离子与葡萄糖酸盐反应生成氧化亚铜沉淀Cu0o
23.氧化亚铜与氢氧根离子0H-反应生成氢氧化亚铜,并释放出铜离CU0H2子Cu2+o
4.氢氧化亚铜与氢氧根离子进一步反应生成氢氧化铜,并释放出氢离CU0H2子H+
5.氢氧化铜与酚酸等指示剂反应,生成紫红色化合物
二、实验步骤
1.准备试剂
0.1M氢氧化钠溶液、
0.05M硫酸铜溶液、
0.1M酒石酸钾钠溶液、酚酸指示剂和葡萄糖标准液
2.取5支试管,分别加入1mL
0.1M氢氧化钠溶液、
0.05M硫酸铜溶液、
0.1M酒石酸钾钠溶液和2滴酚醐指示剂,混匀
3.另取5支试管,分别加入不同浓度的葡萄糖标准液如
0、
0.
5、
1.
0、
2.0和
4.0nmol/L,然后加入与步骤2相同的试剂,混匀
4.将所有试管在37℃水浴中保温30分钟,然后用分光光度计在540nm波长处测定各管的吸光度
5.根据标准曲线计算血糖浓度
三、注意事项
1.实验过程中要保持碱性环境,以利于氧化亚铜的形成
2.葡萄糖标准液的浓度要准确,以保证标准曲线的准确性
3.实验操作应在避光条件下进行,以防止氧化亚铜被光解
4.实验结果受多种因素影响,如温度、时间、试剂浓度等,因此操作过程中要严格控制条件,保证结果的准确性
5.Folin-Wu法是一种较为灵敏的方法,可以检测到较低浓度的血糖但是,对于某些特殊情况下(如低血糖或高血糖),应采用其他更为精确的方法进行测定
6.Folin-Wu法具有操作简便、灵敏度高、试剂成本低等优点,适合于临床常规检测血糖然而,对于某些特殊情况下(如急性糖尿病、应激性高血糖等),应采用其他更为精确和特异的方法进行测定。