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文本内容:
培养基1培养基(公司)MS Sigma培养基()B5pH
5.5Content mg/L Contentmg/L Contentmg/LKNO2500ZnSO47H2O
2.0Nicotinic13CaCI,2H0150H3BO
33.0Thiamine HCI1022MgSO7H0250KI
0.75Pyrindoxine1e42NaH POH0Na MoO2H
01500.25m-lnositol100242242FeSO7H0CoCI6H
027.
80.025Glycine2004222MnSO H0Na EDTA
1037.3Kinetin
0.1422CuSO5H
00.025IAA
0.1-142改良的培养液1/4Hoagland mM,pH
6.0Content mMContent mMKNOZnSO
1.
250.00234H BOCaNO
1.
500.05033MgSO
0.75KCI
0.0504KH PONHMo O
0.
50.075244Z6724FeSO CuSO
0.
0720.001544Na EDTANa SiO
0.
0720.1223植物材料的常规种植2拟南芥种子均匀地播撒于液体培养基浸润的蛭石上,塑料膜遮盖至种子萌1/3B5发,揭开膜,让其自然生长,适当间苗,烤苗至蛭石表面干燥后加水置于23°C,的光照培养间中生长16/8h拟南芥种子的表面灭菌处理3)拟南芥种子在℃下春化天143-5)在超净台上用酒精处理种子分钟270%2-5)弃去酒精,用无菌水洗次31-2)将种子用(公司)处理分钟,间歇振荡415%Bleach KAO15)用无菌水洗次,每次充分振荡混匀54-6)将种子悬浮在灭菌的中
60.1%Agar)均匀地将种子播撒在培养基平皿中7B5植物材料的水培体系4拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于固体培养基上,粒/1/2MS10-15皿,生长周后,小心地将其转入水培体系中2水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成培养皿中盛适当的液体培养基(通常用上述改良的培养液);锡箔纸上留出相距适当的小洞后,1/4Hoagland盖于培养皿之上将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中塑料膜覆盖,天后揭去整个体系置于光照培养间中生长,每天更换2-33-6一次培养液拟南芥插入突变体的筛选方法5T-DNA到网站输入号设计引物、salk LPRPT-DNA LB:LBb1:GCGTGGACCGCTTGCTGCAACTLBa1:TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG用于扩增采用双引物法,分别用扩增基因组PCR LP+RP,BP+RP DNA方法WT HZHM」■.900410+N*N=0-300将拟南芥突变体种子播种于培养基平皿中,生长周后,将其转入蛭石中,1MS2待长至抽苔期准备的提取DNA提取缓冲液的配制2DNA成分终浓度Tris-HCI pH
8.010mMEDTA-Na
312.52mM月桂酰肌氨酸钠SLS1%PVPP1%polyvinylpolypyrollidone剪取一片叶于管中,液氮充分研磨
31.5ml Eppendorf加川提取缓冲液,涡旋充分混匀440℃中水浴分钟,间或混匀几次59520离心分钟612,000rpm15吸取上清于一新的管,取〃稀释倍然后取稀释后的7Eppendorf1050用于扩增DNA PCR扩增体系为体系PCR25W模板1W川rTaq
0.2川IQxrTaq buffer
2.5dNTP
2.5mM2JLLI或LP LBa120piM
0.25|LllRP
0.25ddH O
18.82反应程序PCR℃分钟943℃分钟、941A℃分钟个循环52135℃分钟721℃分钟7210Welcome To川Download欢迎您的下载,资料仅供参考!。