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实验10细菌菌落总数cfu的测定实验10细菌菌落总数cfu的测定引言细菌菌落总数的测定是微生物学实验中的一项重要内容,它可以用于评估食品、水源、环境等样品中的细菌污染情况在实验中,我们通常使用平板计数法来测定细菌菌落总数实验目的
1.了解细菌菌落总数的测定方法;
2.掌握平板计数法的操作步骤;
3.学习如何计算细菌菌落总数实验原理平板计数法是一种常用的测定细菌菌落总数的方法该方法基于假设,即每个菌落是由单个细菌细胞产生的在实验中,我们将待测样品经过适当的稀释,然后将其均匀涂布在含有琼脂的平板上细菌将在琼脂中生长形成可见的菌落通过计数菌落的数量,我们可以推算出原样品中的细菌菌落总数实验步骤
1.准备工作a.清洗实验台面和实验器材,消毒处理;b.准备所需的琼脂平板和培养基;c.配制适当的稀释液,例如
0.9%的生理盐水
2.样品稀释a.将待测样品取出适当体积,如10mL;b.加入相应的稀释液,使总体积增加到一定倍数,例如1:10;c.彻底混合,得到稀释液A;d.将稀释液A取出适当体积,如1mL;e.加入相应的稀释液,使总体积增加到一定倍数,例如1:100;f.彻底混合,得到稀释液B
3.平板涂布a.取一块琼脂平板,将其倾斜放置在实验台上;b.用一支无菌的玻璃棒蘸取稀释液B;c.在平板表面上均匀涂布稀释液B,使其覆盖整个平板面积;d.反复涂布,直到玻璃棒上不再有液滴
4.培养a.将涂布好的琼脂平板盖上透明的塑料薄膜,避免污染和水分蒸发;b.将琼脂平板倒置放在恒温培养箱中,温度设定为适合细菌生长的温度,如37°C;c.培养一定时间,通常为24小时
5.计数a.取出培养好的琼脂平板,将其放在计数仪上;b.使用放大镜或计数仪,仔细观察平板上的菌落;c.用计数棒逐个计数菌落的数量;d.如果菌落数量较多,可以按网格计数法进行计数;e.记录菌落数量
6.计算a.根据实际涂布的稀释液体积和所用平板的面积,计算出每个菌落对应的细菌数量;b.根据菌落数量,推算出原样品中的细菌菌落总数实验注意事项
1.实验过程要严格遵守无菌操作规范,避免污染;
2.平板涂布要均匀,避免菌落重叠;
3.培养温度和时间要根据细菌的生长条件进行调整;
4.计数时要仔细观察,避免漏计或重复计数实验结果与讨论根据实验步骤中的计算方法,可以得到细菌菌落总数的估计值实验结果的准确性和可靠性需要通过重复实验和与其他方法的比较来验证结论通过实验,我们学习了细菌菌落总数的测定方法,并掌握了平板计数法的操作步骤这一方法在微生物学实验中有着广泛的应用,可以用于评估食品、水源、环境等样品中的细菌污染情况同时,我们也了解到了实验中需要注意的事项,以确保实验结果的准确性和可靠性参考文献
1.杜晓阳.微生物实验指导[M].高等教育出版社,2016o
2.童春明.食品微生物学实验教程[M].中国轻工业出版社,2014o。