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文本内容:
)向阳性血小板对照()、阴性血小板对照()中加入A PCPNCP500ul CRP,室温放置至少分钟使之水化轻轻混匀后离心吸干1012000rcf,5-10mino液体残留以得到干燥的血小板扣注意最好用新鲜的正常血小板制备正常血小板洗脱液,如果没有新鲜的血〃板再用试剂盒中提供的干正常血〃板制备洗脱液
4.)在制备洗脱液前要确保血小板已完全沉淀,且不混有残留的A CRP)向已制备的血小板扣中加入洗脱液()枪头吹打混匀,室温B180ul ES,放置分钟离心212000rcf,5mino)迅速将洗脱液转移到一个干净的离心管中,加充分混匀,离C180UIBS,心12000rcf,10mino立即进入下一步实验,或将血小板洗脱液放度冻存
5.-80注意切勿稀释血小板洗脱液向每个微孔内加用去离子水稀释好的洗液,室温放置分钟
6.300ul5-10甩干,倒扣于吸水纸上
7.向相应孔内分别加入血小板洗脱液、已稀释好的对照血清、患者
8.50ul血清注意空白孔中不加任何血清或洗脱液;如果一次检测多个样本,只需做一组对照(阴、阳性血清对照,阴、阳性洗脱液对照);将每一条都做好标记,以免出错盖膜,度孵育分钟,孵育时板底要接触到水,如果接触不到水,
9.3730-35应延长孵育时间分钟5-
8.用稀释液稀释抗10SD1100-IgG稀释液量抗量SD-IgG每次条22000|jl2O|J|每次条66000|jl60|jl取出板子,洗板次,甩干
11.4用稀释液稀释抗
12.SD1100-IgG稀释液量抗量SD-IgG每次条22000|jl20pl每次条66000360|jl除空白孔,每孔加已稀释的抗口盖膜,度分钟.(水浴
13.-IgG501,3730孵育时,板底要接触水面;若为空气浴则应将孵育时间延长分钟)5-8用去离子水溶解瓶粉末,然后用底物缓冲液稀释
14.
0.5ml1PNPP1:100避光SB PNPP每次条24ml40pl每次条612ml120|jl取出板子,洗板次,甩干
15.4除空白孔,每孔加已稀释的室温避光分钟实验环境
16.PNPP lOOpI,30温度必须保持在度,(如果夏天室内温度较高,最后一步显色时间应22-25适当缩短,约分钟即可)
25.加终止液所有孔加,空白孔加川终止液
17.1003200读值,或为参照波长18,405-410nm490nm630nm结果判断阴性对照孔的均值用直,值大于值即被判读为X2=Cuto0D Cutoff阳性附录注意事项:2PAK稀释液最好用前分出所需的总量,避免加样器反复取用污染
1.SD实验环境温度必须保持在・度
2.2225稀释抗不能用玻璃或有机玻璃管,应该用塑料管,即聚乙烯管,如
3.-IgG离心管
1.5ml切记底物必须用去离子水溶解,用底物缓冲液稀释,不要混淆底物溶
4.解后,需避光保存,用前稀释而且一经溶解,只能使用一次上酶标仪读数时将板底用纸巾擦干净
5..阳性对照、阴性对照的平均值质控标准60D阴性对照阳性对照(孔)洗脱液o.ioo nb/nia
1.000(孔)血清
0.160Ilb/nia
1.400实验完毕,需立即将试剂盒放入度冰箱
7.4。