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文本内容:
蛋白质分子量测定实验报告实验报告蛋白质分子量测定
一、实验目的
1.掌握蛋白质分子量测定的基本原理和方法
2.学习使用SDS-PAGE电泳技术测定蛋白质分子量
3.了解蛋白质的基本性质和分子结构
二、实验原理蛋白质分子量测定是蛋白质研究中的基本操作之一通过测定蛋白质的分子量,可以了解蛋白质的结构、功能和分类等信息常用的蛋白质分子量测定方法有SDS-PAGE电泳、渗透压法、凝胶色谱法等本实验采用SDS-PAGE电泳法测定蛋白质分子量SDS-PAGE电泳法是一种基于电泳分离和分子筛作用的蛋白质分离技术在SDS-PAGE电泳中,样品蛋白质与SDS结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物,然后在电场作用下迁移由于SDS的分子量已知,因此根据迁移率和分子量的关系,可以通过计算得出蛋白质的分子量
三、实验步骤
1.准备试剂和仪器1试剂蛋白质样品、SDS、甲叉双丙烯酰胺、Tris-HC1缓冲液pH
6.8>甘氨酸碱溶液、冰醋酸、超纯水2仪器电泳仪、垂直板电泳槽、摇床、离心管、移液器、计时器、分光光度计
2.样品制备1将蛋白质样品用Tris-HC1缓冲液pH
6.8稀释至一定浓度2加入等体积的2XSDS-PAGE样品缓冲液,搅拌均匀3煮沸5-10分钟,使蛋白质变性并充分与SDS结合4离心10分钟,取上清液备用
3.电泳分离1按照电泳仪使用说明书,装配垂直板电泳槽,加入预冷的Tris-HC1缓冲液pH
6.8o2将制备好的样品加入电泳槽中,注意不要产生气泡3接通电泳电源,调节电压为100V,开始电泳分离4电泳过程中保持温度恒定,并及时补充水以保持电泳槽中的水平5当样品迁移至距底部约1cm时;停止电泳
4.染色与脱色1将凝胶取出,用自来水冲洗干净2加入适量考马斯亮蓝染色液,室温下染色30分钟3加入脱色液,室温下脱色至背景清晰4用超纯水清洗并保存凝胶
5.结果分析1用分光光度计扫描凝胶,获取蛋白质的迁移率和分子量的数据2根据迁移率和已知SDS分子量,计算蛋白质分子量
四、实验结果与数据分析表1蛋白质分子量测定结果迁移率Rf样品分子量kDa
0.
3814.2标准蛋白质
0.
4512.3样品蛋白质1样品蛋白质
20.
529.8•••••••••
0.
7866.7标准蛋白质样品迁移率Rf分子量kDa••••••••♦
0.
97194.3标准蛋白质根据SDS-PAGE电泳的原理和已知SDS分子量,可以通过以下公式计算蛋白质分子量M=Rf XMr/Rf-Mr,其中M为待测蛋白质的分子量,Rf为待测蛋白质的迁移率,Mr为已知标准蛋白质的分子量根据此公式,可以计算出表1中各样品的分子量。