文本内容:
实验七酵母的提取及鉴定.rna doc实验七酵母RNA的提取及鉴定
一、实验目的
1.学习从酵母中提取RNA的基本原理和方法
2.学习并掌握RNA的鉴定方法
二、实验原理RNA是以DNA为模板合成的一种重要生物大分子,它在生物体内起着多种重要作用,如蛋白质合成、基因表达调控等本实验采用酵母作为实验材料,通过研磨、离心、沉淀等步骤提取RNA,并通过紫外吸收光谱和凝胶电泳等方法对RNA进行鉴定
三、实验步骤
1.酵母细胞的破碎取适量酵母细胞,加入适量的石英砂和TE缓冲液,充分研磨至酵母细胞破碎,溶液变浑浊
2.离心分离将研磨好的溶液转移至离心管中,在4c下以12000rpm离心lOmin,弃去沉淀,保留上清液
3.RNA的沉淀向上清液中加入等体积的异丙醇,轻轻摇晃混匀,室温静置lOmin后,再次在4c下以12000rpm离心lOmin,弃去上清液,保留沉淀
4.RNA的洗涤向沉淀中加入适量的75%乙醇,轻轻摇晃洗涤沉淀,再次在4℃下以12000rpm离心5min,弃去上清液,保留沉淀
5.RNA的溶解将沉淀室温晾干后,加入适量的DEPC水溶解RNA
6.RNA的鉴定1紫外吸收光谱鉴定取适量RNA溶液,测定其在260nm和280nm处的吸光度值,计算RNA的浓度和纯度2凝胶电泳鉴定取适量RNA溶液,加入适量的甲醛变性胶加样缓冲液,混匀后点样于建琼脂糖凝胶孔中,进行电泳鉴定电泳结束后,观察凝胶中的RNA条带情况
四、实验结果与分析
1.紫外吸收光谱鉴定结果测定RNA溶液在260nm和280nm处的吸光度值,根据公式计算RNA的浓度和纯度一般情况下,纯RNA的A260/A280比值应在
1.8-
2.2之间如果比值低于
1.8,可能说明RNA中存在蛋白质污染;如果比值高于
2.2,可能说明RNA中存在DNA污染本次实验中,测得的A260/A280比值为
2.0,说明提取的RNA纯度较局O
2.凝胶电泳鉴定结果将提取的RNA进行凝胶电泳鉴定,可以观察到清晰的RNA条带一般情况下,真核细胞的RNA电泳图谱中会出现三条明显的条带,分别是28s rRNA、18s rRNA和5s rRNAo其中,28S rRNA的分子量最大,电泳速度最慢,位于凝胶的最下方;5S rRNA的分子量最小,电泳速度最快,位于凝胶的最上方;18s rRNA的分子量介于二者之间,位于凝胶的中间位置本次实验中,可以清晰地观察到三条RNA条带,且条带清晰、分明,说明提取的RNA质量较好
五、实验结论本实验通过研磨、离心、沉淀等步骤成功地从酵母中提取了RNA,并通过紫外吸收光谱和凝胶电泳等方法对RNA进行了鉴定实验结果表明,提取的RNA纯度和质量较高,可以用于后续的实验研究。