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实验-可溶性总糖的测定慈酮法8意酮法是一种常用的测定可溶性总糖的方法,其基本原理是糖类在强酸环境中与意酮反应生成蓝色化合物,该化合物的吸光度与糖含量成正比,因此可以通过测定吸光度来计算糖含量下面我们来详细了解一下实验步骤和注意事项
一、实验原理意酮法测定可溶性总糖的原理是糖类在强酸环境中与慈酮反应生成蓝色化合物,该化合物的吸光度与糖含量成正比在一定的范围内,溶液的吸光度与糖含量成正比,因此可以通过测定吸光度来计算糖含量该方法的优点是灵敏度高、准确性好、操作简单、干扰因素少
二、实验步骤
1.准备试剂和仪器试剂蒸储水、葡萄糖标准溶液已知浓度、待测溶液、意酮、浓硫酸仪器电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、容量瓶、移液管、试管、滴管、冰块等
2.配制工作曲线1用移液管吸取葡萄糖标准溶液100UL,将其加入10个试管中2用移液管分别吸取蒸储水
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010.0mL,分别加入上述试管中,并加入蒸储水至总体积为10mL3向每个试管中加入
1.0mL意酮溶液,迅速混匀4向每个试管中加入浓硫酸
5.0mL,迅速混匀5将试管放置在冰水浴中静置lOmin,使反应完全6从冰水浴中取出试管,在室温下放置lOmin,使溶液温度恢复到室温7用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度波长为625nm8以吸光度为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制工作曲线
3.测定待测溶液的浓度1用移液管吸取待测溶液100u L,将其加入试管中2向试管中加入蒸储水至总体积为10mL3按照步骤
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32.7进行操作,测定待测溶液的吸光度〜4根据工作曲线查得待测溶液的浓度
4.计算待测溶液中可溶性总糖的含量可溶性总糖含量mg/mL=查得浓度X稀释倍数
三、注意事项
1.实验过程中要避免阳光直射,以免影响实验结果
2.在加入慈酮和浓硫酸后要迅速混匀,以免产生局部温差引起飞溅
3.在放置过程中要保持低温,以保证反应充分进行
4.在测定吸光度时要注意将溶液摇匀,避免出现气泡等干扰因素
5.本方法适用于可溶性总糖的测定,如果待测溶液中存在不溶物或者悬浮物,会对测定结果产生影响,因此需要过滤或者离心处理后再进行测定
6.待测溶液的浓度对测定结果有一定影响,因此需要选择合适的稀释倍数以保证结果的准确性。