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双抗体夹心法实验报告elisa实验报告双抗体夹心法实验ELISA
一、实验目的本实验旨在通过双抗体夹心法,检测待测样品中目标蛋白的含量,为相关ELISA研究提供依据
二、实验原理酶联免疫吸附试验是一种灵敏的免疫学检测方法,通过将特异性抗体ELISA与酶标记结合,实现对目标蛋白的定量检测双抗体夹心法是一种常用的技ELISA术,其原理是将两种特异性抗体分别固定在酶标板的不同位置上,形成两个“抗体夹心”,实现对目标蛋白的双重捕获,从而提高检测的灵敏度和特异性
三、实验步骤酶标板包被将第一种特异性抗体包被在酶标板孔中,以固
1.capture antibody定化抗体形式捕获目标蛋白.封闭加入封闭液通常为正常血清或填充孔内未结合的位点,以减2BSA,少非特异性吸附.洗涤洗涤液清洗酶标板,去除未结合的物质
3.样本加入将待测样本加入酶标板孔中,与固定化的抗体发生特异性结合4洗涤再次洗涤酶标板,以去除未结合的物质
5.酶标二抗加入将第二种特异性抗体与酶标记结合,形成
6.detection antibody酶标二抗将酶标二抗加入酶标板孔中,与目标蛋白发生特异性结合,形成“抗体夹心”.洗涤洗涤液清洗酶标板,去除未结合的物质7显色反应加入底物溶液,发生显色反应若目标蛋白存在,则呈现颜色变化
8.终止反应加入终止液,停止显色反应
9.吸光度测定用酶标仪测定各孔的吸光度值通常在处测量,根据吸
10.450nm光度值判断目标蛋白的含量
四、实验结果根据实验数据,绘制标准曲线图和散点图,分析待测样品中目标蛋白的含量通常,标准曲线图横坐标为蛋白浓度,纵坐标为吸光度值通过将待测样品的吸光度值与标准品进行比较,计算出待测样品中目标蛋白的浓度
五、实验总结本实验通过双抗体夹心法成功检测了待测样品中目标蛋白的含ELISA量实验过程中需注意保持操作环境的清洁和干燥,避免影响实验结果此外,还需控制好实验条件和参数,如抗体浓度、包被时间、洗涤次数等,以提高实验的稳定性和可靠性本实验为相关研究提供了可靠的依据,有助于进一步了解待测样品的生物学特性
六、参考文献王晓华,王建华,王淑静,等.双抗体夹心法在病毒抗原检测中
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