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文本内容:
槐米中芦丁及棚皮素的提取分离及鉴定
一、简介芦丁也称芸香昔,广泛存在于植物界,在槐花米和养麦叶中含量较高槐花米系豆科植物槐Sophorajaponica L.的花蕾,古时用作止血药,常用作提取芦丁的原料芦丁有减少毛细血管通透性的作用,临床上主要用于高血压的辅助治疗,对于放射线伤害引起的出血症也有一定的作用棚皮素是芦丁的甘元,广泛存在于水果(如柑橘类)和许多食物如养麦、洋葱等中,具有显著的抗炎作用棚皮素可由芦丁水解制得棚皮素Quercetin OH芦丁Rutin
二、目的
2.熟悉黄酮类成分的主要化学性质
1.掌握黄酮类成分的提取分离方法
3.掌握用薄层色谱或纸色谱鉴定黄酮甘及其昔元和糖的方法
三、基本原理芦丁为淡黄色、细小针状结晶,含3个结晶水,熔点为177-178℃o芦丁可溶于热水1:200,难溶于冷水1:8000,易溶于热甲醇1:
7、冷甲醇1:
100、热乙醇1:30和冷乙醇1:300,难溶于乙酸乙酯、丙酮,不溶于苯、三氯甲烷、乙醛及石油酸等非极性有机溶剂芦丁结构中有多个酚羟基,显弱酸性,故易溶于碱液并呈黄色,酸化后又析出因此,可用“碱提酸沉”法进行提取棚皮素亦为黄色结晶,熔点为313-314℃o为皮素溶于热乙醇1:
23、冷乙醇1:300,还可溶于冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶剂,但不溶于石油醒、苯、乙醛、三氯甲烷和水I、仪器与试剂
1.仪器烧杯100ml,500ml,圆底烧瓶100ml,150ml,抽滤瓶,500ml,冷凝管循环水泵,紫外灯,展开缸,点样毛细管1mm,布氏漏斗,长颈漏斗
2.试剂
0.4%硼砂水,石灰乳,2%硫酸,盐酸,氢氧化钢,三氯化铝,乙醇,甲醇,聚酰胺薄膜,滤纸
五、展开剂及对照品
1.展开剂正丁醇:醋酸:水4:1:5或4:1:1,上层,25%醋酸,85%醋酸,乙醇:水7:3,氨水
2.对照品芦丁,棚皮素,葡萄糖,鼠李糖
六、操作方法
1.芦丁的提取和纯化1提取槐花米20g,置500ml烧杯中,加
0.4%硼砂水的沸腾溶液400ml,此时溶液pH约为6在搅拌下以石灰乳调至pH8,加O热,保持微沸30min,加热过程中以石灰水补充失去的水分并保持pH8静置5-10min使其凉至室温,倾出上清液,过滤,药渣重,复提取一次合并滤液,将滤液用盐酸调至pH5左右滴加8滴三,氯甲烷放置过夜使析出沉淀抽滤,水洗沉淀3-4次,放置空气中自然干燥得粗芦To称重,计算得率()2重结晶粗芦丁2g,以50-60ml乙醇加热溶解,趁热抽滤滤液浓缩至20-30ml,放置使析出结晶,滤取结晶母液浓缩至一半体积,放置又析出结晶滤取并合并结晶,用乙醇重结晶一次,得精制芦丁干燥称重,计算得率称取芦丁1g,置100ml底烧瓶中加2%H2so450ml,
2.芦丁的酸水解小火加热,微沸回流Iho溶液逐渐由澄清变浑浊,析出细小的黄色针状结晶反应结束后,放冷,抽滤(注意保留滤液20ml,以检查其中所含单糖)取结晶,即粗品棚皮素,于100ml底烧瓶中,加50%乙醇50ml,加热回流使溶解,趁热抽滤,滤液转移至三角烧瓶中,放置析晶,抽滤,得精致棚皮素减压下于110℃干燥可得无水棚皮素,熔点313-314℃o
3.黄酮及糖的薄层鉴定
(1)芦丁和棚皮素的鉴定方法一()纸色谱法滤纸新华一号层析用滤纸5x8cm样品溶液自制芦丁及棚皮素少量,以适量乙醇加热(或超声)溶解对照品溶液芦丁及棚皮素适量,以适量加热(或超声)溶解展开剂a.正丁醇-醋酸-水(4:1:5上层或4:1:1)b.25%醋酸水溶液c.85%醋酸水溶液用毛细管各吸取样品和对照品溶液适量,点于滤纸上,分别用上述展开剂展开滤纸吹干后,在可见光及紫外灯360nm下观察色斑,用浓氨水熏滤纸后再在可见光及紫外灯360nm下分别观察色斑变化方法二聚酰胺薄层色谱法样品溶液自制芦丁及棚皮素少量,以适量乙醇加热或超声溶解对照品溶液芦丁及榔皮素适量,以适量乙醇加热或超声溶解展开剂乙醇:水7:3用毛细管各吸取样品和对照品溶液适量,点于聚酰胺薄层上,用上述展开剂展开展开剂吹干后,在可见光及紫外光下观察色斑,用浓氨水熏滤纸后再在可见光及紫外光下分别观察色斑变化2糖的纸色谱鉴定滤纸新华一号层析用滤纸5x8cm样品溶液的制备取芦丁酸水解时保留的滤液20ml,置于50ml烧杯中,分次加BaOH细2粉约
2.6g,使溶液中和至pH7,滤除生成的BaSCU沉淀,滤液水浴浓缩至1ml,为供试品溶液对照品溶液的制备葡萄糖和鼠李糖对照品适量,以少量水溶解即得展开剂正丁醇:醋酸水4:1:5上层或4:1:1用毛细管各吸取供试品和对照品溶液适量,点于滤纸上,用上述展开剂,展开展开剂吹干后均匀喷以苯胺邻苯二甲酸盐试剂105℃烘5min,葡萄糖和鼠李糖均显棕色或棕红色斑点
七、思考题1影响芦丁提取的产量及质量的主要因素有哪些?使用硼砂水溶液的目的是什么?
2.如果芦丁酸水解反应未进行完全,产物会有何不同?
3.用不同的展开剂,或用不同类型的薄层色谱(或纸色谱)分析芦丁和榔皮素时,其结果有何不同?试用液相色谱的基本原理分析对各结构进行分析和说明。