饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查 胶体金快速定量法

ICS点击此处添加中国标准文献分类号DB36江西省地方标准DB36/T XXXX-XXXX饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法Screening ofvomitoxin inanimal feedingstuffsRapid QuantitativeMethod ofColloidal GoldTechnique点击此处添加与国际标准一致性程度的标识文稿版次选择XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施江西省质量技术监督局目次前言II范围11规范性引用文件21原理31试剂和材料41仪器和设备52试样制备与保存62分析步骤72结果表述82重复性93附录（资料性附录）胶体金免疫层析快速筛查组件试剂配制与技术要求A4目次前言II范围11规范性引用文件21原理31试剂和材料41仪器和设备52试样制备与保存627分析步骤2结果表述82重复性93附录（资料性附录）胶体金免疫层析快速筛查组件试剂配制与技术要求A4饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法范围1本标准规定了用胶体金免疫层析法快速筛查测定饲料及饲料原料中呕吐毒素，为定量筛查方法本标准适用于玉米、小麦、大米、黄豆、豆粕、花生粕、等原料中及以玉米粉，小麦粉为主要DDGS基质的饲料成品中呕吐毒素的快速定量筛查定量检测限为检测范围为

0.5mg/kg ppm,

0.5mg/kg ppm—

5.5规范性引用文件mg/kg ppm2o下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682动物饲料试样的制备GB/T20195原理3本方法应用了免疫层析原理将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记针对呕吐毒素的单克隆抗体，用喷金法固定于硝酸纤维素膜上，同时，在硝酸纤维素膜的显色区域有两个条带质NC NC控带和检测带，质控条带上包被有呕吐毒素抗原，检测条带上包被有抗呕吐毒素单克隆抗体的二抗试样提取液中的呕吐毒素与检测条中胶体金微粒上的单克隆抗体发生反应，形成氯金酸-抗体-抗原聚合物，此聚合物和剩余的氯金酸-抗体聚合物在侧流作用下移动，当到达质控线时，质控条带上包被的抗原与剩余的氯金酸-抗体聚合物结合发生呈色反应，颜色深浅与试样中呕吐毒素含量负相关，而氯金酸-抗体-抗原聚合物继续在侧流作用下移动，到达检测条带后，与检测条带上的二抗形成氯金酸-抗体-抗原二抗的聚合物，此条带的颜色同试样中的呕吐毒素含量正相关由于试样中的呕吐毒素的含量一定，质控带的颜色和检测带的颜色此消彼长，呈相关性等试验反应平衡后，用读数仪扫描检测条上显色区域内检测条带和质控条带颜色深浅,根据颜色深浅和读数仪内置曲线计算出试样中呕吐毒素含量试剂和材料4除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合二级水的规定GB/T6682胶体金免疫层析快速筛查组件参见附录

4.1A o呕吐毒素残留检测试纸条

4.2样本提取液的水溶液量取实验用溶液，加入混匀商品试

4.

2.

10.1%Triton X-1001L lgTriton X-100,剂盒中提供此溶液氢氧化钠称取氢氧化钠，加水定容至混匀

4.3NaOH1mol/L40g1000ml,DBXX/T XXX—XXXX盐酸（）量取的盐酸，加水定容至混匀

4.4HCL,1mol/L

83.33mL p=

1.18g/mL1000mL,仪器和设备5天平感量

5.

10.01go涡旋仪

5.2离心机转速

5.323000r/min微量移液器

5.420|iL~200a聚苯乙烯离心管

5.550mLo读数仪可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果

5.6试样制备与保存6试样制备

6.1按要求制备试样GB/T20195试样保存

6.2将试样于T0℃〜-20℃下避光保存分析步骤7试样提取

7.1称取（）饲料样品至聚苯乙烯离心管中，加入样品提取缓冲液（）将

7.

1.

11.00±

0.01g50mL15mL

2.

1.3,瓶塞盖紧，涡动室温以上离心取瓜上清液待测3min,3000r/min5min,100非谷物基质，如果上清液值小于或大于则需要用氢氧化钠溶液（）或盐酸

7.

1.2pH68,1mol/L

4.21mol/L溶液（）调节至左右，然后取此此溶液加入也样本稀释液（）混匀，待测

4.3pH

71006004.

1.2,注不同厂家的呕吐毒素胶体金快速定量条所用的样品制备方法不同，如提供呕吐毒素胶体金快速定量检测条使用说明，则按照使用说明中规定的方法进行操作试样筛查

7.2将胶体金检测条（）从冷藏状态（℃℃）取出放置至最适试验温度（℃℃）将读数仪

7.

2.

14.

1.12-823-25（）打开，按照提示输入样品，检测人员，检测项目，方法等相关信息将比色卡平放于桌面，用读数

5.6仪扫描比色卡上的二维码，等待检测准确移取待测溶液（）加入检测条加样孔中，准确计时分钟

8.

2.2100PL

7.1,5孵育后，用读数仪扫描检测卡，按下读取键，几秒钟读数仪的屏幕上即可显示测试样中呕吐毒

7.

2.35min素的含量信息可选择打印，传输，储存此信息如结果显示,如果检测条上质控线（线）无色，测试线（线）上颜色肉眼可见很深，则表

7.

2.4invalid CT明试样中呕吐毒素含量非常高，可将试样提高稀释倍数，重新进行检测呕吐毒素含量以（毫克每千克）表示，由读数仪直接显示和读取ppm mg/kg重复性9在同一实验室，由同一操作者使用相同仪器，按相同的测定方法，并在短时间内对同一被测试对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于算术平均值的情况不超过虬20%5附录A资料性附录胶体金免疫层析快速筛查组件试剂配制与技术要求样本稀释液配制能达到相当效果者均可A.1磷酸二氢钾

0.2g十二水合磷酸氢二钠

2.9g氯化钠

8.0g氯化钾

0.2gTriton X-

1000.5mL加水定容至1000mLo基本要求A.2工作环境要求A.

2.1气温℃℃23~25o抗原要求A.

2.2呕吐毒素半抗原与载体蛋白进行化学偶联，能够达到包被要求抗体要求A.

2.3用呕吐毒素抗原免疫小鼠，制备针对呕吐毒素的特异性单克隆抗体，能够达到检测要求原材料要求A.3样品垫玻璃纤维或无纺布A.

3.1金释放垫玻璃纤维片，免疫金释放时间小于释放效率大于A.

3.210min,90%反应膜硝酸纤维素膜，孔径为浸润时间不小于

0.45pirn,4cm140s吸水纸A.

3.4塑料卡盒丙烯月青、丁二烯和苯乙烯的三元共聚物性能要求A.4准确度A.

4.1采用和三个浓度水平的样品，每个浓度水平测500^g/kg

0.5ppm1000l^g/kg Ippm2000%/kg2ppm定不低于次,通过偏差来表达，个浓度水平的次重复的偏差均应控制在之间636-20%〜+20%精密度A.

4.2采用浓度水平的实际样品，测定不低于次，通过批内变异系数来表达，变异系数1000Ftg/kg Ippm6应W20%检〉则限A.

4.3计算份阴性样品测定均值加倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值2010批间稳定性A.

4.4采用左右浓度水平的阳性样品，用至少个不同批次的试剂条进行实验，每个批次1000Ftg/kg Ippm3测定不低于次，批内测定取平均值，通过批间变异系数来表达，变异系数应3W25%质控A.5检测阴性质控和阳性质控以验证检测条性能，购买有证的阴性参考样及阳性参考样进行质控，可根据参考样的证书上的真实含量水平对检测体系进行质控。