GST蛋白纯化过程中的常见问题及解决方案

蛋白纯化过程中的常见问题及解决方案GST在生物科学领域，蛋白质纯化是一项关键的技术，它对于研究生物分子的结构和功能至关重要谷胱甘肽转移酶是一种在许多生物体中发现的蛋白质，它参与了多种生物学过程，包括S-GST解毒和细胞保护在实验室中，我们常常使用来纯化目标蛋白然而，在这个过程中，可GST能会遇到一些常见问题本文将探讨这些问题，并提出相应的解决方案

一、目的蛋白结合效率低或不结合

①裂解方式过分的裂解会使标签蛋白变性，阻止其结合建议在裂解过程中调节合适的超声功率和间隔时间或采用温和的机械/化学裂解方法

②缓冲液条件谷胱甘肽-琼脂糖树脂在值低于或高于时，结合效率会降低建议pH

6.

58.0使用前需用为的进行平衡pH

6.5〜

8.0PBS

③蛋白发生变性或聚集建议使用前需用为的进行平衡pH

6.5〜

8.0PBS建议可在裂解前加入的DTT,在缓冲液中也加入DTT；蛋白-核酸结合或蛋白-蛋白结合可加氯化钠

④蛋白或脂类在介质中聚集建议及时清洗介质或更换新的介质

⑤上样过程上样量过载与上样流速过高均会影响标签蛋白的结合GST建议在上样过程中要注意控制上样量与保持低流速融合蛋白发生聚集沉淀

⑥GST建议在裂解和其他缓冲体系中加入Buffer DTT融合蛋白被过度稀释

⑦GST建议重新浓缩样品，增加蛋白浓度

二、目的蛋白洗脱不下来或洗脱率低

①洗脱条件建议:可以通过加大洗脱液体积、降低流速以及延长洗脱液的保留时间等措施提高洗脱效率

②样品没有经过前处理建议样品上柱前必须要经过离心或过滤

③非特异性吸附建议适当选择添加剂降低非特异性吸附

④洗脱缓冲液中谷胱甘肽被氧化建议洗脱缓冲液需现配现用，另外可以尝试加入的l-5mM DTT

⑤洗脱蛋白有杂质融合蛋白被蛋白酶部分降解GST建议加入蛋白酶抑制剂注丝氨酸蛋白酶抑制剂必须在使用凝血酶或凝血因子前PMSF Xa除去融合蛋白被蛋白酶部分降解

⑥GST建议使用蛋白酶缺陷型菌株或或和双缺陷型菌株Ion-ompT,ompT Ion。