文本内容:
细菌革兰氏染色实验报告
一、实验目的掌握革兰氏染色的方法
1..熟悉细菌涂片的制备
2.革兰氏染色法进行细菌鉴定3
二、实验材料.实验仪器1显微镜、酒精灯、载玻片、擦镜纸、接种环,接种针,、试管架、镶子、载玻片夹子、滤纸、滴管.实验试剂2草酸钱结晶紫染色液、碘液、乙醇、番红复染液、无95%菌水,蒸镭水,、香柏油、二甲苯
三、方法与步骤
1.操作方法示意图干燥,,水,,水,,水,,晾干,制片一一初染-------媒染-----------脱色----------复染一一镜检
2.操作步骤步骤一,涂片的制作⑴涂片载玻片一张,加一滴生理盐水,取菌研磨均匀⑵干燥温室干燥,或置酒精灯高处慢慢烘烤3固定干燥后的涂片,在酒精灯火焰中通过3次步骤,二,初染,滴加草氨酸结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色后倾去染液,水洗至1—2min,流出水无色步骤,三,媒染,先用碘液冲去残留水迹,在用碘液覆盖倾去碘液,水洗至流出水无lmin,色步骤,四,脱色,将玻片上残留水用吸水纸吸去,在白色背景下用滴管流加乙醇脱色,95%一般〃当流出液无色时立即用水洗去乙醇20——30s步骤,五,复染,将玻片上残留水用吸水纸吸去,用番红复染液染色,水洗,吸去残2min水晾干步骤,六,镜检,像涂片涂菌部位滴加适量香柏油,进行油镜观察【小结】1选用活跃生长期长的菌种染色,老龄的革兰氏阳性菌会被染成红色,造成假阴性.2涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性.
3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够,造成假阳性,脱色过度造成假阴性
4.染色原理菌,胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而c+孔障缩小,故保留结晶紫一碘复合物在细胞膜上呈紫色菌,肽聚糖层薄,交联松散,C-乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫一碘复合物溶出细胞壁,沙皇复染后呈红色【注意事项】加热时使用载玻片及试管夹,以免烫伤
1..使用染液时应避免沾在衣物上
2.使用乙醇时勿靠近火焰
3.试验前后要洗手4实验后,整理实验操作台,显微镜油镜擦干净,保持清洁
5.。