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利用农杆菌转化法将北极海鱼的抗冻基因导入到番茄细胞,获得具有抗冻性状的番茄,具体操作如下,获得目的基因可用或者()扩增得到目的基1PCR因,前提是;若抗冻基因序列未知,可构建包含抗冻基因在内的,然后从中获取(核心):将抗冻基因和质粒通过
2.Ti形成重组质粒,能形成重组质粒的原因是_______(答出2点)实际操作中,常采用双酶切法,目的是影响拼接效率的因素除了温度、、渗透压等环境因素以及反应o pH时间外,还有_______________________________(答出2点).将重组分子导入农杆菌用处理农杆菌,目的是增大农杆菌细胞膜的3DNA通透性,使其处于一种的状态,这种细胞称为影响转化的因素除了温度、、渗透压等环境因素以及转化时间外,还有(答出o pH2点)转化之后,加入液体培养基,置于上慢速振荡培养一段时间,目的是选用的农杆菌应该是限制性核酸内切酶缺陷型,原因是o.筛选含有目的基因的农杆菌由于,因此需要进行筛选可以利用质粒上的标记基4Ti因进行筛选,也可以采用鉴定目的基因是否导入成功.转化将成功导入目的基因的农杆菌和植物组织共培养,在共培养过程中实现影响5o转化效率的因素有农杆菌的数量、共培养的时间和温度等环境条件,还有(答出点)2共培养后,将植物材料转入含的培养基中培养,同时添加以去除附着的农杆菌.检测植物细胞是否成功导入目的基因可采用
6.植物组织培养转基因番茄成功导入目的基因的番茄外植体经脱分化形成愈伤组织,利7用愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是通过调节营养物质和植物生长调节剂的适当配比,诱导出芽和根的,进而再生出新植株的途径;二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的途径第二条途径中,也可以先将含有愈伤组织培养物的试管放在摇床上,通过分散成单细胞这种单细胞经过培养基中成分的诱导,可发生类似受精卵经过卵裂、分化、而发育成胚的过程,即从单细胞依次到细胞团、和胚状体,最后再生出完整的植株.目的基因的表达可通过技术、技术在分子水8平上检测目的基因是否表达,也可在个体水平检测,具体操作是利用农杆菌转化法将北极海鱼的抗冻基因导入到番茄细胞,获得具有抗冻性状的番茄,具体操作如下.获得目的基因可用化学合成法或者聚合酶链式反应()扩增得到目的基因,前提1PCR是目的基因(抗冻基因)序列已知;若抗冻基因序列未知,可构建包含抗冻基因在内的基因文库,然后从中获取.形成重组分子(核心)将抗冻基因和质粒通过限制性核酸内切酶和连2DNA Ti DNA接酶形成重组质粒,能形成重组质粒的原因是有互补/相同的粘性末端,均为双螺旋结构实际操作中,常采用双酶切法,目的是防止目的基因自身环化,防止目的基因和质粒反向拼接影响拼接效率的因素除了温度、、渗透压等环境因素以及反应时间外,pH还有目的基因的浓度、质粒的浓度、连接酶的浓度和活性(插入到质粒的TiDNATi区段)T-DNA.将重组分子导入农杆菌用氯化钙处理农杆菌,目的是增大农杆菌细胞膜的通透3DNA性,使其处于一种能吸收周围环境的分子的状态,这种细胞称为感受态细胞影响DNA转化的因素除了温度、、渗透压等环境因素以及转化时间外,还有重组分子的pH DNA浓度,农杆菌的种类、数量,农杆菌的状态转化之后,加入液体培养基,置于摇床上慢速振荡培养一段时间,目的是使处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态(表达抗生CaCL素抗性基因)选用的农杆菌应该是限制性核酸内切酶缺陷型,原因是防止限制性核酸内切酶将目的基因剪切.筛选含有目的基因的农杆菌由于并不是所有的农杆菌都接纳了重组分子,因此4DNA需要进行筛选可以利用质粒上的标记基因进行筛选,也可以采用或者核酸分子Ti PCR杂交技术鉴定目的基因是否导入成功.转化将成功导入目的基因的农杆菌和植物组织共培养,在共培养过程中实现转5T-DNA移并整合到植物细胞的染色体上影响转化效率的因素有农杆菌的数量、共培养的时间和温度等环境条件,还有农杆菌的种类,番茄的种类,番茄的基因型,外植体发育阶段,外植体的取材部位共培养后,将植物材料转入含植物生长调节剂和营养物质的培养基中培养,同时添加抗生素以去除附着的农杆菌.检测植物细胞是否成功导入目的基因可采用或核酸分子杂交技术6PCR.植物组织培养转基因番茄成功导入目的基因的番茄外植体经脱分化形成愈伤组织,利7用愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是通过调节营养物质和植物生长调节剂的适当配比,诱导出芽和根的顶端分生组织,进而再生出新植株的器官发生途径;二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径第二条途径中,也可以先将含有愈伤组织培养物的试管放在摇床上,通过液体悬浮培养分散成单细胞这种单细胞经过培养基中成分的诱导,可发生类似受精卵经过卵裂、分化、器官发生和形态建成而发育成胚的过程,即从单细胞依次到细胞团、球形胚、心形胚和胚状体,最后再生出完整的植株.目的基因的表达可通过分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术在分子水平上8DNA-RNA检测目的基因是否表达,也可在个体水平检测,具体操作是将转基因番茄和正常番茄置于低温环境下,比较转基因番茄是否具有抗冻性状.化学合成法聚合酶链式反应目的基因(抗冻基因)序列已知基因文库1形成重组分子限制性核酸内切酶和连接酶有互补/相同的粘性末端,均为双
2.DNA DNA螺旋结构防止目的基因自身环化,防止目的基因和质粒反向拼接目的基因的浓度、质Ti粒的浓度、连接酶的浓度和活性DNA能吸收周围环境的分子感受态细胞重组分子的浓度,农杆菌的种类、
3.CaCI DNADNA2数量,农杆菌的状态摇床使处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态(表达抗生素抗性CaCb基因)防止限制性核酸内切酶将目的基因剪切并不是所有的农杆菌都接纳了重组分子或核酸分子杂交技术
4.DNA PCR转移并整合到植物细胞的染色体上农杆菌的种类、番茄的种类、番茄的基因型、
5.T-DNA外植体发育阶段、外植体的取材部位适当配比的营养物质和植物生长调节剂抗生素或核酸分子杂交技术
6.PCR(顶端)分生组织器官发生胚胎发生液体悬浮培养器官发生和形态建成球形胚、心形
7.胚分子杂交抗原-抗体杂交将转基因番茄和正常番茄置于低温环境下,比较转
8.DNA-RNA基因番茄是否具有抗冻性状。