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Semicarbazide-13C,15N2氨基服-13CJ5N21173020-16-0CH6CIN3O
114.56Hydrochloride盐酸盐标准溶液配置
3.3标准储备液准确称取(精确到)氨基麻盐酸盐标准品,置于棕色
3.
3.
114.9mg
0.0001g50mL容量瓶中,用甲醇()溶解并定容至刻度,配成浓度为的标准储备液,保存,
3.
1.1200mg/L-18C存效期三个月内标标准储备液准确称取(精确到)氨基胭」盐酸盐标准品,置
3.
3.
214.7mg
0.0001g3C1N2于棕色容量瓶中,用甲醇()溶解并定容至刻度,配成浓度为的标准储备50mL
3.
1.1200mg/L液,保存,存效期三个月-18℃
3.
3.3标准工作液准确量取
0.2mL标准储备液(
3.
3.1),置于200mL棕色容量瓶中,用甲醇(
3.
1.1)溶解并定容至刻度,配成浓度为的标准工作液,保存,存效期一个月
0.200mg/L-18C
3.
3.4内标工作液准确量取
0.2mL内标标准储备液
(332),置于200mL棕色容量瓶中,用甲醇(
3.
1.1)溶解并定容至刻度,配成浓度为
0.200mg/L的内标工作液,-18C保存,存效期一个月仪器与设备4液相色谱-串联质谱仪配有电喷雾离子源
4.1天平感量分别为和
4.
20.0001g
0.01go超声波发生器
4.3旋转蒸发仪
4.4离心机
4.5恒温箱
4.6涡旋混合器
4.7高速离心机
4.8分析步骤5试样制备
5.1从原始样品中取出有代表性样品约充分混匀,均分成两份,分别装入干净密封袋作为500g,试样,密封,并注明标记将试样置于室内避光保存衍生化
5.
1.1称取约(精确至)样品,置于玻璃比色管中,加入盐酸
2.0g
0.01g50mL10mL
0.2moL/L()涡旋后,在依次加入内标工作液()邻硝基苯甲醛溶液()
3.
1.8,30s
3.
3.450pL,
0.1moL/L
3.
1.9200(1L,超声提取10min,置37℃恒温箱中过夜(16h)反应提取
5.
1.2衍生后力口入乙酸乙酯(
3.
1.3)50mL,具塞后剧烈震摇1min,超声提取10min,用10mL移液枪吸取上清液至蒸发瓶中,并将其接至旋转器上,于水浴中减压蒸馈至40mL100mL45℃干,加入2mLi0%甲醇水溶液(
3.L12)充分溶解,含油脂的样品用4mL乙月青饱和的正己烷(
3.
1.10)液液分配,除去脂肪,100001701抽离心501访,过
0.20pim有机滤膜后,液相色谱-串联质谱测定基质标准溶液制备
5.
1.3分别称取份,每份约(精确至)阴性样品,分别置于玻璃比色管中,
52.0g
0.01g50mL均加入101匕
0.2010171盐酸(
3.
1.8),涡旋30s后,分别加入标准工作液(
3.
3.3)10RL、20|1L添加浓度分别为再加入内标50|1L100gL200pL,1|ig/kg2jxg/kg5gg/kg10|ig/kg20|ig/kg,工作液()(即内标含量为)余下操作同和当样品浓度超出线性范围时,
3.
3.450|1L5|ig/kg,基质标准溶液的浓度可根据需要进行调整仪器参考条件
5.2液相色谱条件
5.
2.1)色谱柱柱,()或性能相当者;a MGIH-C18150mmx
2.1mm id,
5.0|im,b)柱温25℃;)进样量叱;c10)流动相及洗脱条件见表d2表流动相及线性梯度洗脱条件2时间流动相(甲醇)流动相(乙酸镂)/min AB
0.010moL/L015%85%355%45%1155%45%
11.115%85%1515%85%)流动相流速e
0.3mL/min质谱条件
5.
2.2a)离子源电喷雾离子源(ESI);)扫描方式正离子模式;bc)检测方式多反应监测(MRM);d)干燥气温度340℃;e)干燥气流速8L/min;f)雾化器压力;40psi;g)毛细管电压4000V;)定性离子对、定量离子对及碰撞能量见表i3表3多反应监测(MRM)条件被测物质名称母离子子离子碎裂电压碰撞能量//V eV氨基胭209166;192*10010/10氨基胭同位素内标
212.
4195.11205注*为定性离子定性测定
5.3被测目标化合物选择一个母离子,个以上子离子,在相同实验条件下,样品中待测物质的2保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在之内;且样品中被测组分定性离子的相对丰±
2.5%度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表规定的范围,4则可判定为样品中存在对应的待测目标化合物基质标准溶液的液相色谱/串联质谱色谱图见附录的图A A.1表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差4相对离子丰度%5020-5010-2010允许的最大偏差±20±25±30±50%定量测定
5.4标准曲线的制作
5.
4.1按浓度由小到大的顺序,将基质标准溶液分别注入高效液相色谱/串联质谱仪中,按
5.
1.3仪器参考条件进行测定,测定氨基胭及其内标峰面积,以基质标准溶液中目标化合物的浓度
5.2和内标的浓度的比值为横坐标,以目标化合物峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标,绘制标准曲线试样溶液的测定
5.
4.2将试样溶液注入高效液相色谱/串联质谱仪中,按仪器参考条件进行测定,得到相
5.
1.
25.2应的样品溶液和内标物的色谱峰面积比值利用根据标准曲线得到试样测定溶液中待测组分的浓度,平行测定次数不少于两次空白试验
5.5除不称取试样外,均按照以上步骤进行结果计算6试样中氨基胭含量按式计算1X=p1式中X—试样中氨基胭的含量,单位为微克每千克|ig/kg;由标准曲线得到的试样中氨基腺的浓度,单位为微克每千克P—llg/kg;注计算结果需将空白值扣除,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字精密度7在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%其他8本方法对小麦粉及其制品中氨基版残留的检出限为定量限为本方法在加
0.5|ig/kg,
1.0|ig/kgo标量为度/内,加标回收率为
1.0pg/kg〜
10.0kg
75.0%〜
105.3%空白试验,应无干扰附录A氨基服特征离子质量色谱图图氨基服及其同位素内标标准溶液的色谱图A.1MRM氨基服;氨基服同位素内标
1.
2.本方法负责起草单位北京市食品安全监控和风险评估中心(北京市食品检验所)验证单位山东省食品药品检验研究院、河北省食品检验研究院、国家食品质量监督检验中心(上海)、北京市理化测试分析中心、北京市产品质量监督检验院主要起草人耿健强、王浩、贾靖怡、陈江龙、张杉、赵文霞。