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文本内容:
选修课时血红蛋白的提取和分别114学习目标L了解色谱法、电泳法等分别生物大分子的基本原理
2.体验提取生物大分子的基本过程和方法自主梳理L蛋白质的分别原理依据蛋白质各种特性的差异分别不同种类的蛋白质,如分子的、所带电荷的溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等
3.凝胶色谱法1概念也称做,是依据分别蛋白质的有效方法/形态微小的_____________⑵凝胶《组成:大多数由一构成、结构:内部有许哀’⑶分别原理分别物质通道路程速度相对分子质量较大凝胶外部—较快相对分子质量较小较长
4.缓冲溶液⑴组成通常由1~2种溶解于水中配制而成⑵作用抵制外界的酸和碱对的影响而保持其稳定
5.电泳⑴概念指在电场的作用下发生_________________的过程⑵原理电泳利用了待分别样品中各种分子以及分子本身的的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分别⑶两种常用方法和聚丙烯酰胺凝胶电泳
6.血红蛋白的提取和分别红细胞•的联选方法*------------------------1结果至上清液不再显成政色I jf1血红蛋白的样被红细眼在__________________的作用样下破裂•徉故出血各iXflt:
1.步骤混合液离心一_____________________处一用分一汨斗分离下红色透而液体分离山理次为红蛋白离心结果试普溶液分为西原•从上到卜依溶液红汨鲍破储物沉淀原理透析袋能使_自由进出•而格X保的云袋内2目的,将样品中的杂质去除红茉白溶液装入透析袋中.ftl透析袋放入盛有的物硬的浓度为•透析300rnL fit12h⑶即样品的加入和洗脱O4纯度鉴定o
7.凝胶色谱操作⑴凝胶色谱柱的制作
①取长40cm,内径为
1.6cm的玻璃管,
②选择适合封堵玻璃管口的,中间打孔,孔径大小耍能够紧密插入
0.5mL的移液管
③将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴,将
0.5mL的头部切下5cm长的一段,插入橡皮塞孔内,插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面
④将尼龙网覆盖在橡皮塞的凹穴上,再用将橡皮塞上部包好,插到玻璃管的一端
⑤在色谱柱下端用头部作出口部位,连接一细的尼龙管;并用螺旋夹限制尼龙管的打开与关闭,尼龙管的另一端放入收集器内
⑥柱顶部的制作,在色谱柱的另一端插入安装了玻璃管的⑵凝胶色谱柱的装填
①材料本试验运用的是_________o
②方法凝胶用充分溶胀后,配成凝胶悬浮液,一次性缓慢倒入色谱柱内
③留意事项a.商品凝胶运用前需干脆_________________;b.装填时可,使凝胶装填匀整;C.不能有气泡存在,防止其,降低分别效果;d.不能发生_________________的现象
④检验假如红色区带匀整一样地移动,说明色谱柱制作成功⑶样品的加入与洗脱调整缓冲液面与凝胶面平齐I滴加透析样品用吸管将(DmL透析后的样品加到色谱柱的I样品渗入凝胶床打开下端出口,使洗脱打开下端出口,用洗脱I课堂练习
1.推断正误凝胶色谱法分别蛋白质时利用了蛋白质相对分子质量大小和形态的不同
2.推断正误在凝胶色谱法分别过程中,血红蛋白比相对分子质量较小的杂蛋白移动慢
3.推断正误电泳时带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
4.推断正误猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核,提纯时杂蛋白较少
5.推断正误用于透析的薄膜具有选择透过性
6.推断正误可通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去
7.推断正误若红色区带不匀整地移动,说明色谱柱制作成功收集待接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每5mL收集一管,连续收集
1.凝胶色谱法分别蛋白质的原理依据是A.依据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小B.依据蛋白质相对分子质量的大小C依据蛋白所带电荷的多少D.依据蛋白质溶解度的大小
2.利用凝胶色谱法,什么样的蛋白质先洗脱出来A.相对分子质量大的B.溶解度高的C相对分子质量小的D.所带电荷多的
3.关于电泳的说法不正确的是A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B.带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动c.蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D.用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小
4.样品的加入和洗脱的操作不正确的是A.加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
8.加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内C等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口D.,用吸管当心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面
5.在利用凝胶电泳法分别蛋白质时,确定要加入缓冲溶液,起到的作用是A.使酶的活性最高B.使蛋白质的活性最高C维持蛋白质所带电荷D.使蛋白质带上电荷6•下面是凝胶色谱法分别血红蛋白时样品加入图I和洗脱图II示意图请据图回答下列问题:图fflI u1在加样品示意图中,正确的依次是__________O⑵用吸管加样品时,应留意正确操作,分别是
①;
②;
③O3等样品后,加入缓冲溶液待接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每mL收集一管,连续收集【自主梳理】
1.形态和大小,性质和多少
①②③④
2.1支配色谱法相对分子质量的大小⑵多孔球体多糖类化合物贯穿的通道⑶较短凝胶内部较慢
3.1缓冲剂2溶液pH
4.1带电粒子迁移⑵带电性质的差异大小、形态⑶琼脂糖凝胶电泳
5.1去除杂蛋白低速短时间离心蒸储水和甲苯过滤除去脂溶性沉淀层有机溶剂甲苯血红蛋白溶液⑵小分子大分子相对分子质量较小20mmol/L的磷酸缓冲液中3纯化凝胶色谱法4SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳
6.1
①两端磨平
②橡皮塞
③移液管
④尼龙纱
⑤移液管
⑥橡皮塞⑵
①交联葡聚糖凝胶
②蒸偏水
③放在洗脱液中膨胀轻轻敲动色谱柱搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序洗脱液流干,露出凝胶颗粒⑶顶端样品渗人凝胶床内磷酸缓冲液红色的蛋白质【预习小测】
1.x
2.x
3.
45.x6・
77.x【随堂自测】L B
2.A
3.C
4.A
5.C
6.1@—►
①—►
②—
③⑵
①不要破坏凝胶表面
②贴着管壁加样
③使吸管管口沿着管壁环绕移动⑶完全进入凝胶层红色的蛋白质5【解析】在装填好的色谱柱中加入样品时,先打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓缓下降到与凝胶面平齐,关闭出口用吸管当心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端,留意加入时要使吸管管口沿管壁环绕移动,贴着管壁加样,以免破坏凝胶面
④,加样后打开下端出口,使样品渗入凝胶床内,等样品完全渗入之后,关闭下端出口
①,接着接受同样的方法加入^冲液到适当高度
②,连接^冲溶液洗脱瓶进行洗脱
④待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每5mL收集一管,连续收集。