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一次性使用卫生用品鉴定试验一次性使用卫生用品是指使用一次后即丢弃的,与人体直接或间接接触的,并为达到人体生理卫生或卫生保健(抗菌或抑菌)目的而使用的各种日常生活用品,产品性状可以是固体也可以是液体例如,一次性使用手套或指套(不包括医用手套或指套)、纸巾、湿巾、卫生湿巾、卫生棉(棒、签、球)、化妆棉(纸、巾)、纸质餐饮具、电话膜、帽子、口罩、内裤、妇女经期卫生用品(包括卫生护垫)、尿布等排泄物卫生用品(不包括皱纹卫生纸等厕所用纸)、避孕套等,以及卫生部所发布的其他一次性使用卫生用品样品采集1于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品,1/4样品用于检测,1/4样品用于留样,另样品(可就地封存)必要时用于复检抽样的最小销售包装不应有破裂,检验前不得启开样品微生物污2/42染鉴定细菌菌落总数与初始污染菌检测法
2.1()样品的处理1在级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少个包装,从每个包装中取样,准确称取样品100310g±lg剪碎后加入到灭菌生理盐水(如产品中含有抑菌或杀菌成份,须加入相应的中和剂)中,充分混匀,得200ml到一个生理盐水样液液体产品用原液直接作样液(如产品中含有抑菌或杀菌成份,须在样液中加入相应的中和剂)如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时,稀释液量可按每次递增,直至能吸50ml出足够测试用样液
(2)活菌培养计数待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液接种个平皿,参照进行活菌培养计数5()结果报告3当总菌落数在以内,按实有数报告,大于时采用二位有效数字如果样品菌落总数超过标准值,100100按下述方法进行复检和结果报告()复检方法4取留存的复检样品依前法复测次,次结果平均值都达到标准规定者,则判定被检样品合格;如其中仍22有次结果平均值超过标准规定,则判定被检样品不合格1大肠菌群检测方法
2.2()操作步骤1取样液接种乳糖胆盐发酵管,置培养若不产酸也不产气,则报告为大肠菌群阴5ml50ml35℃±2℃24h,性如产酸产气,则划线接种伊红亚甲蓝琼脂平板,置培养观察平板上菌落形态典型的大35c±2℃18h〜24h,肠菌落为黑紫色或红紫色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,常具有金属光泽,也有的呈紫黑色,不带或略带金属光泽,或粉红色,中心较深的菌落取疑似菌落个作革兰染色镜检,同时接种乳糖发酵管,置1〜235℃±2℃培养观察产气情况24h,()结果报告2乳糖胆盐发酵管产酸产气,乳糖发酵管产酸产气,在伊红亚甲蓝平板上有典型大肠菌落,革兰染色为阴性无芽泡杆菌,可报告被检样品检出大肠杆菌铜绿假单胞菌检测方法
2.3()操作步骤1取样液加入到培养液中,充分混匀,置培养如有铜绿假单胞菌生长,5mL50mlscDLP35c±2℃18h〜24h培养液表面呈现一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色或蓝绿色从培养液的薄菌膜处挑取培养物,划线接种十六烷三甲基澳化镂琼脂平板,置培养观察菌落特征铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好,菌35℃±2℃18h〜24h,落扁平,边缘不整,菌落周围培养基略带粉红色,其他菌不长取可疑菌落涂片作革兰染色,镜检为革兰阴性菌者应进行下列试验氧化酶试验取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内,用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上,然后在其上滴加一滴新配制的二甲基对苯二胺试液,内出现粉红色或紫红色,为氧化酶试验阳性,不变色者1%30s为阴性绿脓菌素试验取个个可疑菌落,分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面,培养加入三2〜335℃±2℃24h,氯甲烷充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解,待三氯甲烷呈蓝色时,用吸管移到另一试管3ml〜5mL中并加入的盐酸振荡后静置片刻如上层出现粉红色或紫红色即为阳性,表示有绿脓菌素存在lmol/L1mL硝酸盐还原产气试验挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐陈水培养基中,置培养培养基小35℃±2℃24h,倒管中有气者即为阳性明胶液化试验:取可疑菌落纯培养物,穿刺接种在明胶培养基内,置培养取出放于35℃±2℃24h,4c〜10℃,如仍呈液态为阳性,凝固者为阴性42c生长试验取可疑培养物,接种在普通琼脂斜面培养基上,置培养有铜绿假单胞菌生42℃24h〜48h,长为阳性结果报告2被检样品经增菌分离培养后,证实为革兰阴性杆菌,氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者,即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和生长试验三者皆为阳性时,42c仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌检测方法
2.4操作步骤1取样液加入到培养液中,充分混匀,置培养自上述增菌液中取或接5mL50mlscDLP35℃±2℃24h12种环,划线接种在血琼脂培养基上,置培养在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色,大而突35℃±2℃24h〜48h起,圆形,不透明,表面光滑,周围有溶血圈挑取典型菌落,涂片作革兰染色镜检,金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌,排列成葡萄状,无芽抱与荚膜镜检符合上列情况应进行下列试验甘露醇发酵试验取上述菌落接种甘露醇培养液,置培养发酵甘露醇产酸者为阳性35℃±2℃24%血浆凝固酶试验玻片法取清洁干燥载玻片,一端滴加一滴生理盐水,另一端滴加一滴兔血浆,挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合,如血浆内出现团块或颗粒状凝块,而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性,5min如两者均无凝固则为阴性凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象,再进行试管凝固酶试验试管法吸取14新鲜血浆放灭菌小试管中,加入等量待检菌肉汤培养物混匀,放温箱或水浴中,每
0.5mL24h
0.5ml35℃±2℃半小时观察一次,之内呈现凝块即为阳性同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各作24h
0.5ml为阳性与阴性对照结果报告2凡在琼脂平板上有可疑菌落生长,镜检为革兰阳性葡萄球菌,并能发酵甘露醇产酸,血浆凝固酶试验阳性者,可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌溶血性链球菌检测方法
2.5操作步骤1取样液加入到葡萄糖肉汤,培养将培养物划线接种血琼脂平板,培养5ml50ml35℃±2℃24h35℃±2℃观察菌落特征溶血性链球菌在血平板上为灰白色,半透明或不透明,针尖状突起,表面光滑,边缘整齐,24h周围有无色透明溶血圈挑取典型菌落作涂片革兰染色镜检,应为革兰阳性,呈链状排列的球菌镜检符合上述情况,应进行下列试验链激酶试验吸取草酸钾血浆草酸钾加兔血浆混匀,经离心沉淀,吸取上清液,加入
0.2ml
0.01g5mL灭菌生理盐水,混匀后再加入待检菌肉汤培养物和氯化钙混匀,放
0.8ml24h
0.5ml
0.25%
0.25mL35℃±2℃水浴中,观察一次一般内可凝固,待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间如内不溶化,继2min10min2h续放置观察,如凝块全部溶化为阳性,仍不溶化为阴性24h24h杆菌肽敏感试验将被检菌菌液涂于血平板上,用灭菌镶子取每片含单位杆菌肽的纸片放在平板表面
0.04上,同时以已知阳性菌株作对照,在下放置有抑菌带者为阳性35℃±2℃18h〜24h,结果报告2镜检革兰阳性链状排列球菌,血平板上呈现溶血圈,链激酶和杆菌肽试验阳性,可报告被检样品检出溶血性链球菌真菌菌落总数检测方法
2.6操作步骤1待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数共接种个平皿,每个平皿中加入样液,然后51ml用冷却至左右的熔化的沙氏琼脂培养基倒入每个平皿内混合均匀,琼脂凝固后翻转平皿置45℃15ml〜25ml25c培养分别于、、观察,计算平板上的菌落数,如果发现菌落蔓延,以前一次的菌落计数为准±2℃7d,3d5d7d结果报告2菌落呈片状生长的平板不宜采用;计数符合要求的平板上的菌落,按下式计算结果X K=x尸5卜式中XF为样品真菌菌落总数,cfu/g或cfu/ml;乂为5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数;K为稀释度当菌落数在以内,按实有数报告,大于时采用二位有效数字100100如果样品菌落总数超过本标准的规定,按下述方法进行复检和结果报告复检方法3将留存的复检样品依前法复测次,次结果平均值都达到标准的规定,则判定被检样品合格;其中有任22何次结果平均值超过标准规定,则判定被检样品不合格1真菌定性检测方法
2.7操作步骤1取样液加入到沙氏培养基中,培养逐日观察有无真菌生长5ml50ml25c±2℃7d,结果报告2培养管混浊应转种沙氏琼脂培养基,证实有真菌生长,可报告被检样品检出真菌产品杀菌性能、抑菌性能及其稳定性鉴定3杀菌性能与抑菌性能试验取样部位,根据被试产品生产者的说明而确定杀菌性能测试方法
3.1试验菌与菌液制备11试验菌细菌金黄色葡萄球菌ATCC6538,大肠杆菌8099或ATCC25922;酵母菌白色念珠菌ATCC10231o染菌样片制备:取菌株第代代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物用磷酸23〜1418h〜24h,5mL
0.03moi/L盐缓冲液以下简称洗下菌苔,后用上述稀释至所需浓度,取滴于样片上,使PBS PBS100U
12.0cmX
3.0cm回收菌数达义隆加/片片110〜9X10%fu/菌液制备取菌株第代代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物用磷酸盐缓33〜1418h〜24h,5ml
0.03mol/L冲液以下简称洗下菌苔,使菌悬浮均匀后用上述稀释至所需浓度.PBS PBS中和剂鉴定试验2参照中和剂载体定量鉴定试验方法进行杀菌试验3参照载体浸泡定量杀菌试验方法进行操作步骤1将试验菌斜面培养物用洗下,制成菌悬液要求的浓度为用滴于对照样片上,回收菌数24h PBS100H1为片片IX IO,eg/〜9X l4cfu/取被试样片和对照样片与试样同质材料,同等大小,但不含抗菌材料,且经灭菌处理各
2.0cmX
3.0cm4片,分成组置于个灭菌平皿内44取上述菌悬液,分别在每个被试样片和对照样片上滴加100”,均匀涂布,开始计时,作用2min、5min、lOmin.用无菌镶分别将样片投入含相应中和剂的试管内,充分混匀,作适当稀释,然后取其中个个稀20min,5ml2〜3释度,分别吸取置于两个平皿,用凉至的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母
0.5ml,40℃〜45℃菌)作倾注,转动平皿,使其充分均匀,琼脂凝固后翻转平板,培养(细菌)或(酵母15ml35℃±2℃48h72h菌),作活菌菌落计数试验重复次,按下式计算杀菌率3X=Nc—3()()*1%式中为杀菌率,%;为对照样品平均菌落数,片;刈为被试样品平均菌落数,片X Nccfu/cfu/
(4)评价标准杀菌率产品有杀菌作用290%,溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能测试方法
3.2()操作步骤1将试验菌斜面培养物用洗下,制成菌悬液(要求的浓度为用滴于对照样片上或样液24h PBS100U15ml内,回收菌数为足/片或向~皿/片或血)1104©910%取被试样片(
2.0cmX
3.0cm)或样液(5ml)和对照样片或样液(与样片同质材料,同等大小,但不含抗菌材料,且经灭菌处理)各片(置于灭菌平皿内)或管44取上述菌悬液,分别在每个被试样片或样液和对照样片或样液上或内滴加均匀涂布/混合,开始计100U1,时,作用用无菌镶分别将样片或样液()投入含的试管内,充分混匀,2min5min10min20min,
0.5ml5mlpBS作适当稀释,然后取其中个个稀释度,分别吸取置于个平皿,用凉至的营养琼脂培养2〜
30.5mL240℃〜45℃基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)作倾注,转动平皿,使其充分均匀,琼脂凝固后翻转平板,15ml35℃±2℃培养(细菌)或(酵母菌),作活菌菌落计数48h72h试验重复次,按下式计算抑菌率3X=Nc~NsxlOO%Nc式中为抑菌率,%;为对照样品平均菌落数,片;为被试样品平均菌落数,片,()X Nccfu/Ns cfu/2评价标准抑菌率产品有抑菌作用,抑菌率产品有较强抑菌作用250%〜90%,90%,非溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能测试方法
3.3参照振荡烧瓶试验方法进行稳定性测试方法
3.4()测试条件1)自然留样将原包装样品置室温下按使用说明书规定的时间抽样进行抑菌或杀菌性能测试1)加速试验将原包装样品置恒温箱内或恒温箱内个月,保持相对湿度254℃〜56℃14d37c〜40℃375%,抽样进行抑菌或杀菌性能测试()评价标准2)自然留样,其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值,产品的杀菌或抑菌作用有效期为自然留样时间1)加速试验,其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值,产品的杀菌或抑菌作用有效期为室温保存至254℃少年1)加速试验,其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值,产品的杀菌或抑菌作用有效期为室温下至少保337C持年2产品环氧乙烷残留量测试方法(可参见)4GB15979-2002。