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实验室菌种常用保存方法2023微生物具有容易变异的特性,因此,在保存过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保存方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的保存方法大致可分为以下几种
1.斜面低温保存法将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上,得到充分生长后,用封口膜封口,贴上标签,保存于4T的冰箱中此法操作简单、使用方便、不需要特殊设备,是实验室菌种保存最常用的方法但保存时间短,一般每个月都要移种1次,而且菌种容易变异,所以此方法只适合实验室短期实验菌株的保存
2.半固体琼脂法用接种针将以分纯的待存菌,穿刺接种于半固体中,放入培养箱培养后出,封上无菌的液体石蜡,贴上标签,放4T冰箱保存此方法简便易操作,不需特殊设备、技术难度不大,但保存的时间不长,一般只能保存1年以内,而且对抵抗力弱以及一些特殊菌种大概只能存活3〜6个月,需要频繁的传代,这样很容易使菌株受到污染、变异所以此方法不适用菌种的长期保存,只适合实验室一些要求不高的菌种的短期保存
3.液体石蜡保存法将液体石蜡灭菌,放于37T恒温箱中,使水汽蒸发掉备用再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体,用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡,注入已长好的斜面培养基上,用量以高出斜面1cm为准,将试管直立,贴上标签,置4(下保存此法制作简单,不需要特殊设备,菌种可以保存1年左右不需要经常移种,缺点是保存的时候需要直立放置此方法适合实验室短期保存,而且保存时需要一定的空间
4.高层半固体琼脂石蜡保存法将待存菌经平板划线分离后,挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高固体琼脂培养基中,经培养箱培养后取出,用灭菌过的液体石蜡滴加到半固体琼菌种管表层约
0.5cm高度,贴上标签,存放4(冰箱此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌株1〜2年所以适合实验室菌株的较长期的保存
5.纸片法将已分纯的待存菌用无菌银子银取纸片,在纸片上刮取4〜5个菌落,入冻存管内,盖上盖子后用封口胶布封住边缘,贴上标签,放入冰箱冷冻保存(-20V左右)此方法具有操作简单、不需特殊设备、经济实用、保存空间小等而且保存时间至少2年,但对一些营养要求比较高的菌种,存活率不理想所以方法适合实验室一些营养要求不高的菌种较长时间的保存
6.甘油液保存法将已分纯的待存菌接种于肉汤中,37T培养18〜24h,然后按5份肉汤溶液、2份甘油-生理盐水保存液的比例分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中,贴上标签,置-80℃〜-20(冰箱保存此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌种3年左右,无变异现象,而且此方法还可以保存一些要求较高的特殊菌种,适用范围广所以此方法适合实验室普通菌种或特殊菌种的较长期的保存。