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文本内容:
的提取和纯化实验RNA材料与仪器缓冲液、溶液和试剂
1.氯仿焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的H20(GenHimterR105)乙醇乙醇洗液(用处理过的配制)70%DEPC H20异丙醇苯酚-肌盐单相溶液(推荐)RNApure,GenHunterP501-P503磷酸盐缓冲液()PBS离心机和转头
2.小离心机专用设备
3.锥形管50ml小离心管
1.5ml(原文为一译者改)移液器1000ul mlo平板100-150mm移液器P10Pdytron匀浆器(用于从组织中提取RNA)步骤
一、提取方法从组织培养物中提取RNA1:RNA如果细胞贴在瓶壁或平板上,则倒掉培养基,将平板置于冰上
1.
2.如果细胞是悬浮的,旋转离下细胞,并除去培养基用的冷磷酸盐缓冲液()漂洗细胞
3.10~20ml PBS倒掉并用移液器吸去残留的
4.PBS,lOOOul PBSo每平板加入苯酚-服盐单相溶液(),以裂解细胞(摇
5.100〜150mm2ml RNApure晃平板使溶液分布均匀)这个体积足够裂解万~万个细胞o1001000将平板放在冰上
6.Wmino将裂解液吸到两个标记好的离心管中
7.
1.5ml方法从组织中提取2:RNA在装有组织的锥形管中,加入至少苯酚-服盐单相溶液
1.50ml2ml()并置于冰上组织和酚溶液的理想比例至少应该是RNApure,1:10用匀浆器将组织搅匀,直到组织完全分散为止
2.Polytron将管子置于冰上
3.10mino取裂解液,分装到标记好的离心管中
4.1ml
1.5ml方法从血液中提取3:RNA将血液产品离心,并除去血浆
1.按照上面从组织中提取的说明进行操作
2.RNA
二、的纯化RNA每毫升裂解液加入氯仿,涡旋混匀
1.150uI lOmino本方案可以在此处停止,并将裂解液放置在-8(rc在以最大转速离心
2.4℃10min.小心地将上清液转移到一个干净的、标记好的离心管中
31.5ml加入等体积的异丙醇,并在冰上放置,然后剧烈地混匀或涡旋混匀
4.lOmin30so将混合物在以最大转速离心
5.4℃lOmin用预冷的乙醵用处理过的配制)洗涤沉淀,在(最
6.1ml70%DEPC H20RNA4大转速离心2min7,倒掉乙醇短暂离心后,用移液器吸去残留的洗液将在处理过的中重新悬浮
8.RNA5ulDEPC H20注意如果用于任何扩增反应,悬浮液中不要使用RNA SDSo取(用移液器硼定浓度用稀释在下读数,
9.lulRNA P101ml H20260nm注意lOD260=40ugo。