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IgM捕获ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体附件1本试剂盒系接受抗人口链捕获人血清IgM抗体,加辣根过氧化物醵一病毒抗原标记物,用以检测出血热特异性IgM抗体具有较高的敏感性、特异性和重复性特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它试验性探讨本试剂盒为96人份/包装试验材料
(1)抗人IgM抗体(u链)用pH
9.5的包被液包被酶标板
(2)冻干阳性血清/冻干阴性血清1支,
0.2m支,工作浓度为110;
(3)冻干辣根过氧化物酶一病毒抗原标记物1支,
0.5口支,工作浓度为120;
(4)冻干小牛血清1支,1ml/支;
(5)浓缩洗液(10倍浓缩)1瓶,50ml;(标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液);
(6)A/B显色液和终止液各1瓶(冻干试剂先用相应量的去离子水溶解,然后临用前依据所需按工作浓度稀释运用,余下的放-20℃保存)
(7)终止液4N HS024
(8)酶标仪检测步骤
(1)将待检血清用稀释液100倍稀释,加入己包被抗人u链抗体的酶标板一孔中,100U1/孔,同时加入已110稀释的阳性血清/阴性血清比照各一孔,100U1/孔,置37℃水浴孵育1小时
(2)弃去血清,用PBS-T漂洗5遍,甩干
(3)将冻干辣根过氧化物酶一病毒抗原标记物110稀释后,加入反应板相应孔内,100U1/孔,37℃水浴孵育1小时
(4)弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤6次,甩干
(5)加显色液:于各反应孔内加A/B液各一滴,37℃,避光3〜5分钟
(6)加终止液(4NH2S04)于每反应孔,一滴/孔结果推断:
(1)目测方法阳性比照孔呈明显蓝色,阴性比照孔呈无色,比照成立;若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色(TMB),则标本为出血热IgM抗体阳性,反之阴性
(2)酶联免疫检测仪检测于450nm(TMB)阳性比照孔0D值/阴性比照孔0D值,即P/N
22.L比照成立;若待检血清孔0D值与阴性比照孔0D比值
22.1,则标本为流行性出血热IgM抗体阳性,反之阴性(阴性比照孔0D值小于
0.05按
0.05记,若大于
0.05按实际数值计算)意义阳性结果,表明患者新近汉坦病毒感染,用于出血热早期诊断。