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检测试剂盒(原位杂交)EBER(操作之前请详细阅读此说明书)检测原理和意义是病毒编码的小是病毒的表达产物,在病毒感染的细胞核EBER EBRNA,EB EB中以高拷贝数存在依据的特有序列设计的单链探针能特异地与EBER EBERDNA EBER靶序列互补、杂交,从而检测病毒是否存在此方法检测石蜡组织切片中的病毒EB EB具有极高的特异性和灵敏性目前原位杂交已成为组织和细胞中病毒的标准检EBER EB测方法,在国际上广为运用试剂盒供应的材料和试剂保存方提供量成份法人份2050^^杂交液℃1EBER-20400ul
1.0ml蛋白酶℃2K440ul lOOul一抗℃341ml
2.5ml二抗℃441ml
2.5ml聚合物℃5HRP41ml
2.5ml底物℃6DAB41ml
2.5ml℃7DAB420ul50ul室盖玻片4C/18X18mm片片82050温湿盒增效液室4”930ml30ml温(留意:EBER杂交液请-209保存)用户自备材料和试剂℃恒温培育箱二甲苯
1.
558.恒温培育箱酒精
2.37C
9.光学显微镜
3.
10.PBSpH=
7.6移液器苏木素
4.
11.计时器氨水
5.
12.玻片染色缸和染色架盐酸酒精
6.
13.湿盒个
7.2试验前需配试剂30%湿盒增效液取湿盒增效液与蒸谯水,按配制成湿盒增效液备用3:730%试验时需配试剂IX蛋白酶K4将蛋白酶与按的比例配制备用(现配现用)K1XPBS1:25B、DAB显色液依据须要配制显色液,以可覆盖整个组织的量为宜取与底DAB DABDAB物,依据的比例混匀,避光保存备用(现配现用)1:50操作步骤切片处理将厚度的组织粘附在处理的载玻片上,切片于
1.4tlm APES60-7CTC烘烤分钟以上(建议每次试验同时附加阳性、阴性比照片)
60.脱蜡与水化:2溶液次数时间(分)X二甲苯3X10酒精100%1X3(留酒精意:运95%1x3用过酒精的二甲80%1X3苯,蒸福水应相应1x3延长脱蜡时间,以保证脱蜡完全)蛋白酶消化甩干切片,将组织四周液体用滤纸吸干,每张切片滴加适量
3.K1蛋白酶工作液做50til,依据组织大小增、减量),室温孵育分钟蒸X K5饰水洗涤分钟,当心擦干组织四周液体1X
1.杂交4每张切片滴加适量杂交液约ul依据组织大小增、减量),并加盖玻片(本试剂
4.129盒配备,可依据加入杂交液量进行剪裁卜,放置水湿盒中,恒温箱孵育-分钟;
4.255C69转至孵育小时(放置于30%湿盒增效液湿盒中)建议过夜(v
164.337C4-16小时)以保证低拷贝样本的杂交效果;℃(PBS预温)浸泡切片,当心移去盖玻片,接着浸泡分钟;
4.4485℃洗涤分钟(略微振荡容器卜,
4.548PBS3x5(留意:盖玻片规格应与杂交液量匹配,切片在整个试验过程中要保持潮湿状态,防止干片)信号放大与显色
5.当心擦去组织四周液体,滴加适量一抗第50ul,依据组织大小增、减量),℃
5.137,水湿盒中孵育分钟;℃浸泡分钟(略微振荡容器”3037PBS3x2当心擦去组织四周液体,滴加适量二抗第50ul依据组织大小增、减星),室温,水
5.2f湿盒中孵育分钟;室温浸泡分钟(略微振荡容掰;20PBS3x2当心擦去组织四周液体,滴加适量聚合物第50ul,依据组织大小增、减量),
5.3HRP室温,水湿盒中孵育分钟;室温浸泡分钟(略微振荡容器)30PBS3x2当心擦去组织四周液体,滴加适量显色液留50ul,依据组织大小增、假圜,
5.4DAB室温,水湿盒中孵育约分钟(不同样本的显色时间可能有所差别,建议镜下视察1显色过程”室温浸泡分钟(略微振荡容器)PBS3x2自来水冲洗,苏木精复染(可用盐酸酒精分化与氨水返蓝)梯度酒精脱水,中性
5.5树胶封片阳性结果推断标准仅为细胞核着色胞浆和胞膜着色不能视为阳性,只有当核分裂时可以出现胞浆阳性着色其他事项本试剂保质期为个月客户在收到产品时请与时检查,如发觉有外包装破损、试12剂盒成分不全等产品问题,或者在运用过程中有任何疑问,请与时与泰普客户服务中心联系,我们将与时为您解决公司信息公司名称福建泰普生物科学有限公司总部福建省福州市金山金洲北路号金山科技企业孵化器号楼层邮774编350002电话传真800-804-8333,0591-280536000591-28053700研发中心北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦座室邮编A207102206电话传真010-80720071010-80720072操作步骤简表操作参数二甲苯13X10酒精2100%1X3酒精395%1X3酒精480%1X3蒸镭水51X3酶消化室温6,5蒸储水,71加杂交液适量8℃变性95560-90℃37,4-湿盒增效液的湿盒中孵育1030%16h(用前预温)脱片+浸泡,,11PBS480c1-5+5(用前预温)浸泡,12PBS48C3X5加一抗℃1337,30(℃)浸泡冲洗,14PBS373X2加二抗室温,1520浸泡冲洗,16PBS3X2聚合物室温,17HRP30浸泡冲洗,18PBS3X2显色室温,19DAB2-101浸泡,20PBS3X2自来水冲洗],21复染,脱水,封片常规22。