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灭菌与消毒指示器材鉴定试验压力蒸汽灭菌生物指示物鉴定试验1目的
1.1测定压力蒸汽灭菌生物指示物所含菌量,以及在饱和蒸汽作用下的存活时间、杀灭时间与值121c±
0.5℃D是否达到要求指标实验器材
1.2压力蒸汽灭菌生物指示器材抗力检测器1biological indicatorevaluator resistometer,pressured steam下简称抗力检测器对抗力检测器要求的技术指标时间控制以秒为单位;温度控制以sterilization,BIER,
0.1C为单位;加热至预定温度的时间应WlOs;排气时间W5s;试验期间柜室内温度误差W±
0.5℃温箱256℃~60℃澳甲酚紫蛋白豚培养液嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基,见附录3A嗜热脂肪杆菌芽胞恢复琼脂培养基见附录4A眼科镶子夹取菌片用5磷酸盐缓冲液6PBS,
0.03mol/L,pH
7.2o回收液含吐温的液
70.1%80PBS生物指示物微生物含量与抗力标准
1.3嗜热脂肪杆菌及加妨或芽抱回收菌量为片1ATCC7953SSIK315xl5cfu/〜5x16cfu/片,或5x105cfu/ml-5xl06cfu/mlo在⑵饱和蒸汽条件下,存活时间杀灭时间2℃±
0.5℃
23.9min,W19min在⑵饱和蒸汽条件下,值为3℃±
0.5℃D L3min〜L9min生物指示物含菌量的测定
1.4随机抽取个生物指示物样本样本如为菌悬液式指示物,直接用作适当稀释后,按规定进行3PBS
2.LL3活菌培养计数即可;样本如为含菌载体式指示物如菌片,应先置回收液中洗下芽胞,并以稀释至适当浓PBS度,再进行活菌计数培养培养温度为观察结果培养基仍用营养琼脂培养基检测菌量符合56c〜60C,24h者为合格
1.3存活时间和杀灭时间的测定
1.5下以生物指示管的测定为例试验按作用时间分为和两组,各组测定个样本
13.9min19min20先将抗力检测器的电热蒸汽发生器加满蒸镭水,以不超过最高水位为度2接通检测器电源,预热,使达到预定蒸汽压3设定灭菌温度和作用时间4121℃±
0.5℃启动抗力检测器工作程序,使自动运行两个循环,以保证柜室等得到充分的预热5将生物指示管每批放个样本放专用载物架上并置抗力检测器柜室中,保证每个样本都可充分暴露620于蒸汽中关闭柜门,先设定一组所规定的灭菌时间7启动抗力检测器工作程序,使自动进行抽真空一柜室加热一灭菌处理一排气8打开柜门,取出生物指示管9紧接着重复的程序进行另一组的测定105〜9取出的生物指示管应尽快勿超过放入温箱,培养观察最终结果112h56℃~60℃7d,测定结果,组存活时间组个生物指示管均有菌生长;组杀灭时间组个生物指示管
123.9min2019min20均无菌生长时,可判为合格其中一个组或两组各有一个样本未达规定要求,可再用组样本重复试验
43.9min和组各测试次重复试验中,如各样本均达规定要求,仍可认为合格19min2[对生物指示菌片测定时,操作程序与判断标准与上述生物指示管基本相同,只是将单片菌片装于牛皮纸袋中,以防灭菌时被冷凝水浸湿此外灭菌完毕,需将样本分别接种于溪甲酚紫蛋白陈培养液中培养,观察最终结果]7d值的测定
1.6D随机抽取个样本,在范围内分成个作用时间组进行试验每组个样本作用时间150Omin〜20min105递增幅度,可根据预备试验结果适当变动最长时间必须达到使菌全部死亡的作用时间将各组样本按所示程序,分次进行灭菌处理
21.52-10灭菌完毕,按所示对各组样本随机抽取个进行活菌培养计数3L43计算每个作用时间样本上平均存活芽瓶数的对数值以作用时间为横坐标存活芽抱数的对数值为纵4X,坐标算出芽胞存活与作用时间的回归方程Y,Y=a+bXo计算各实际测定值与直线回归方程的相关程度相关系数5根据所得直线回归方程式,计算出减少芽胞数所需的作用时间值值符合者为合格690%D D
1.
31.7稳定性试验在规定的贮存条件下,存放足量产品1按使用说明书规定的有效期限抽样检测,先观察外观,特别注意指示剂中的培养液颜色有无变化2在外观正常情况下,进一步按所示方法测定活菌数量、存活时间、杀灭时间菌量数下降
31.
41.550%,存活时间和杀灭时间又在规定合格范围内见者,该贮存期可视为产品的有效保存期L3注意事项
1.8测定生物指示剂的抗力时,必须用压力蒸汽灭菌生物指示剂检测器进行,不能用普通压力蒸汽灭菌器代1替使用抗力检测器进行测定时,为确保每次加热时间的一致,每次间隔时间不宜超过如时间过长,2100s柜室必须重新预热培养基性能对热损伤后的芽泡恢复有一定影响,试验时不能用普通培养基代替恢复培养基3严格无菌操作,尤其是对生物指示菌片进行存活和杀灭时间测定时4压力蒸汽灭菌化学指示卡鉴定试验2目的
2.1测定下排气式、预真空式和脉动真空式压力蒸汽灭菌化学指示卡下简称化学指示卡产品在饱和蒸汽作用下所产生的颜色变化,与拟代表的温度、杀菌作用时间的吻合情况,以作为判断该指示卡是否合格的依据对其他相似类型化学指示物的鉴定,可参照本试验的有关原则进行实验器材
2.2压力蒸汽灭菌生物指示物抗力检测器[见下简称抗力检测器]
11.21,生物指示物经鉴定合格者,见21留点温度计应经检定合格360℃〜140℃,试验分组
2.3试验根据作用温度和时间分组,一般情况下,以使用说明书表明的变色温度和作用时间为第组,而后温1度不变,作用时间缩短为第组;另外,作用时间不变,仍为温度下降为第组预真空和lOmin220min,4℃3脉动真空式压力蒸汽灭菌,因所需作用时间很短,故第组只降低即可22min例如,某一下排气式压力蒸汽灭菌化学指示卡使用说明书写明,在温度为作用可全部达到变121C,20min色完全与标准合格色块相同对该指示卡鉴定试验时,可分组如下第1组121℃,20min;第2组121℃,lOmin;第组3117℃,20mino又如,某一预真空式压力蒸汽灭菌化学指示卡使用说明书写明,在温度为作用可全部达到变132℃,3min色完全对该指示卡鉴定试验时,可分组如下第1组132℃,3min;第2组132℃,Imin;第组3128℃,3mino[分组测试的目的是
①验证使用说明书所表明的温度和作用时间,能否使指示卡变色完全;
②测试灭菌不完全的温度或时间条件下,化学指示变色不完全未达到与标准合格色块深度相同的比例]实验室试验操作程序
2.4每组试验,取片化学指示卡、件生物指示器材和支留点温度计,同时放入抗力检测器中11011操作抗力检测器,将各组样本按所示程序分次进行处理各试验组要求的温度和作用时间,见
21.52-
102.3o立即打开柜门,取出上述物品,进行检测3检测时,观察留点温度计所示温度;对比化学指示卡上变色色块与标准合格色块的颜色,确认是否达到4合格要求;将生物指示物放入温箱中培养并观察是否有菌生长56℃7d,系统记录各组留点温度计、化学指示卡和生物指示物的结果5各组试验均重复次63次测定结果均符合以下全部情况者可判为合格
①第组指示卡变色完全,第组与第组指731100%23示卡<变色完全;
②各组生物指示物结果与指示卡基本同步;
③留点温度计读数与试验规定的温度,相差20%不超过±
0.5℃o稳定性试验
2.5取包装完好并在室温、避光、干燥条件下,保存至一定时间至少半年的化学指示卡,用实验室试验
2.4方法进行检测若结果符合上述要求,可视为指示卡在该保存期内性能稳定注意事项
2.6化学指示卡的鉴定,除注意其在到达灭菌要求温度和时间时可变为合格颜色外,还必须观察其在未达到1灭菌要求温度和时间时是否不会变成合格颜色从防止灭菌不合格角度看,后者更为重要因此,在试验中低于灭菌要求温度和时间组绝不可省略测定时应使用饱和蒸汽,否则可影响结果的准确性2留点温度计检定时所观测到的误差,在记录试验温度时,应将读数校正3压力蒸汽灭菌生物指示物抗力检测器为一专用设备,国外和我国均有生产由于试验要求的精密度较高,4不宜用一般压力蒸汽灭菌器代替试验中所用化学指示卡和生物指示物必须为同批产品5下排气式和预真空包括脉动真空式压力蒸汽灭菌对温度和作用时间的精确度要求不同,故在两类化学6指示卡试验分组中温度和作用时间的组距亦不同,两者不宜混用对所要求的重复性试验,不可只在同次试验中增加一些化学指示卡,而应每重复一次试验即应进行一次7压力蒸汽灭菌处理,以防产生系统性误差压力蒸汽灭菌化学指示胶带与化学指示标签的鉴定试验3目的
3.1测定压力蒸汽灭菌用化学指示胶带与化学指示标签在规定温度的饱和蒸汽和作用时间下的变色情况,以作为判断该指示胶带和标签是否适用于作为经压力蒸汽灭菌处理标志的依据实验器材
3.2下排气式压力蒸汽灭菌器与预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器1留点温度计经鉴定合格260℃~140℃,试验分组
3.3试验根据作用温度和时间分组,一般情况下化学指示胶带和标签所要求的准确度较化学指示卡类产品为宽松分组时,以使用说明书表明的变色温度和作用时间为第组;而后,温度不变,作用时间缩短为第1lOmin2组;另外,时间不变,温度下降为第组10℃3预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌,因所需时间很短,故第组缩短至即可2Imin例如,使用说明书表明,某种用于下排气式压力蒸汽灭菌的化学指示胶带,在温度为作用121℃,20min可全部达到变色完全与标准合格色块相同试验时,可分组如下第1组121℃,20min;第2组121℃,lOmin;第组3111℃,20mino又如,某一用于预真空与脉动真空式压力蒸汽灭菌的的化学指示胶带,说明书写明,在温度为作用132℃,可全部达到变色完全试验时,可分组如下3min第1组132℃,3min;第2组132℃,Imin;第组3122℃,3min[分组测试的目的是
①验证使用说明书所表明的温度和作用时间,能否使样本变色完全;
②测试灭菌不完全温度或时间条件下,化学指示胶带与化学指示标签变色不完全未达到与标准合格色块深度相同的比例]试验操作程序
3.4每组试验取个标签或来自不同卷的段胶带,粘贴于厚纸片上,随同一留点温度计放入相应的压力蒸155汽灭菌器中按常规灭菌方法处理,待达到要求的温度及其相应的压力,持续至规定的时间,排空柜室内蒸汽使成常2压打开柜门,取出样本3观察、记录化学指示胶带、标签,是否变色和留点温度计显示的温度4各组试验重复次53次试验均符合以下条件者为合格
①第组全部样本变色完全,
②第和第组变色完全的样本比例63123不超过20%o
③留点温度计所示温度与设定的温度相差不超过±
0.5℃[对未印有变色完全的标准色块的指示胶带和标签,可依据生产者另外提供的完全变色样本,对变色完全与否进行判断]稳定性试验
3.5取包装完好的样本,在室温、避光、干燥条件下保存至使用说明书规定的有效期限,用规定的方法进
3.4行检测,若结果符合要求,所测指示胶带与标签可视为在该保存期内性能稳定注意事项
3.6于条件下检测合格者,只能于灭菌时使用,于条件下检测合格者,只能于灭菌1121℃121℃132℃132℃时使用只有两组检测均合格者,才能兼用于上述两种温度灭菌的监测其他注意事项见中的有关内容
22.6紫外线灯管照射强度化学指示卡鉴定试验4目的
4.1测定紫外线灯管照射强度化学指示卡下简称指示卡在照射后颜色的变化与所受照射剂量的相关情况,从而确定是否可用于使用单位对紫外线灯管照射强度的自检试验器材
4.2紫外线照度计在计量标定有效期内,下简称照度计12低臭氧直管紫外线灯[30W,紫外线强度辐照度值^90|iW/cm2]o紫外线灯测定架附稳压器下简称测定架3220V试验操作程序
4.3将紫外线灯装于测定架上,指示卡置灯管下方垂直中心位置的照射台上灯管与照射台距离可上下调整,1以使达检测时规定的照射强度开启紫外线灯,待后灯管工作稳定,按指示卡上各标准色块注明的强度,分别调整好灯管下照射25min台中心测试点处的紫外线照射强度用照度计测定,以进行随后的照射试验照射时,在测定架上对指示卡变色区进行照射每张指示卡为一组,每组照射每个强度照射310Imin,3组共张指示卡30照射后,即刻用肉眼观察照射过的指示卡,比较其变色区色块与相应标准色块的颜色4同时用照度计测定紫外线照射强度,以与指示卡结果核对5变色区色块与标准色块,以及指示卡检测结果与照度计测定结果的符合率均者,可判定为合格6290%稳定性试验
4.4在室温避光条件下,存放足量指示卡1按使用说明书规定的期限抽样,每次抽取份样本按方法进行检测
2204.3试验结果符合合格要求[]可认为该存放时间即为其贮存有效期
34.36,注意事项
4.5为防失准,所用照度计必须定期检测校正,并在计量标定有效期内1试验中所用指示卡必须为同一批产品2测试时,对指示卡照射时间应准确,过长或过短均可影响结果3Imin,指示卡测定时,应防紫外线灯光直射4光敏指示卡反应变色后,久存可能颜色有所改变,为此检测结果应即时观察并用文字记录5测试应分多次进行,否则易发生系统误差6电压波动可影响灯管放射的紫外线强度,试验时应予注意7消毒剂浓度试纸鉴定试验5目的
5.1通过检测消毒剂浓度试纸下简称试纸颜色反应情况与溶液中消毒剂浓度相关程度,以作为对其应用做出评价实验器材
5.2消毒剂有效成分化学分析器材测定分组
5.3鉴定中,应根据试纸使用说明书所列可测试消毒剂种类分别进行测试测试中,取比色卡上所示标准色块中的高、中、低个浓度作为个组对每种消毒剂,每组浓度测试个样本取自个以上最小包装组333033的主要有效成分浓度,均应分别用化学滴定法测定试验操作程序
5.4配制各种消毒剂的高、中、低组浓度溶液,并按本规范中有关方法测定其主要有效成分浓度13对各消毒剂浓度组,分别用试纸浸于溶液中,润湿即取出半分钟后与标准色块比较,确定所测浓度2每条试纸作为个样本,逐个样本分别进行测定1将试纸测得的浓度与化学滴定法测得的浓度比较,该组样本总符合率三者为合格390%稳定性试验
5.5按说明书要求,在室温存放足量指示卡1按使用说明书规定的期限抽样,按所示方法进行检测
25.4试验结果符合合格要求[]者,可认为该存放时间即为其贮存有效期
35.43注意事项
5.6有效成分不稳定的消毒剂,应在试纸检测后尽快用化学法滴定其浓度1对于反应后颜色可消退的产品,应及时观察结果,并用文字记录1。