灭菌与消毒器械消毒功效鉴定试验

灭菌与消毒器械消毒功效鉴定试验干热灭菌柜1目的

1.1测定干热灭菌柜下简称灭菌柜对细菌芽他的杀灭效果，以验证其灭菌性能是否符合设计规定试验器材

1.2枯草杆菌黑色变种芽抱菌片染菌载体以不锈钢片或玻片为代表,必要时可1ATCC937210mm x10mm,随灭菌对象，增用或改用其他载体菌片上细菌芽泡在条件下，存活时间杀灭时间160℃±2℃

23.9min,^19min,值为D l.3min~L9min营养肉汤培养基见附2Ao活菌培养计数所需器材见

32.

1.

1.2o使用说明书中规定灭菌柜可以处理的物品装填灭菌柜，使达满载要求4o多点温度测定仪5柜内温度测定

1.3将温度测定仪的多个探头，分别放于灭菌柜的各层内、中、外不同部位在柜内摆放模拟的常规处理物品，至使用说明书规定灭菌时的最高量满载关闭柜门，开启电源，按灭菌柜设计程序进行灭菌每记录3min,各点的温度试验重复次，计算各点不同时间的平均温度，并在试验报告中以图表列出3灭菌试验

1.4根据试验要求，制备枯草杆菌黑色变种芽泡悬液和芽抱样片1每次试验取个菌片为一组，平放于无菌平皿内，勿重叠加盖，分置于灭菌柜的各层，内、中、外不22同部位试验时，灭菌柜内除菌片样本外，还应满载以模拟的常规处理物品关闭柜门，开启电源，按灭菌柜设计程序进行灭菌灭菌完毕，取出平皿，将菌片取出接种于含

35.0ml营养肉汤培养基试管中，置培养箱内作定性培养后观察结果37℃72h肉汤管混浊者表示有菌生长，判为阳性；肉汤管澄清者表示无菌生长，继续培养至第若仍无菌生长，7d,判为阴性对难以判定的肉汤管，取其中悬液接种营养琼脂平板，用灭菌棒涂抹匀，置培养箱中培养

0.2ml L37℃后涂片染色，在显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，以判断生长者是否为试验菌若有非试验48h菌污染，应查找原因重新进行试验测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组菌片对照与阴性对照组培养基对照4定量阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将该菌片片分别移入含52试管中，各振荡次洗涤按所示方法进行活菌培养计数

5.0mlPBS80定性阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将试验菌片片，分别接62种于营养肉汤培养基，放入培养箱中作定性培养，观察细菌生长情况

5.0ml阴性对照组，以空白样片片，分别接种于营养肉汤培养基，同时将未接种过的营养肉汤培养基

725.0ml放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长试验重复次85在次试验中，每次试验中阳性对照菌片的回收菌量均应达片片；定性阳性对照组，955xl5cfu/〜5xl6cfu/细菌生长良好；阴性对照应无菌生长阳性或阴性对照若有不符合上述耍求的结果，试验作废，重新进行评价规定

1.5在次测定温度的试验中，各点平均温度均达设计要求13在次灭菌试验中，各次试验定量阳性对照的回收菌量均达片片；定性阳性对照组，255xl5cfu/〜5x106cm/细菌生长良好；阴性对照组样本应无菌生长所有试验菌片均无细菌生长时，可判为干热灭菌合格空气中臭氧浓度不得超过臭氧吸入过多，可使人中毒，试验场所应保持通风良好

30.3mg/m3,温度和相对湿度均可影响臭氧气体对细菌的杀灭效果，试验时必须控制好这些条件，使其前后一致4臭氧水消毒器8目的

8.1检测臭氧水消毒器发生的臭氧水消毒剂对物品表面的消毒效果，以验证臭氧水消毒剂对物品表面消毒的实用剂量臭氧水消毒剂指应用臭氧消毒设备制备的含臭氧的水溶液，并以其作为消毒剂，用于对物品表面等的消毒试验器材

8.2金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌1ATCC65388099ATCC15442ATCC悬液和脊髓灰质炎病毒悬液10231染菌载体以布片为代表，必要时可随消毒对象，增用或改用其他载体2lOmmxlOmm,臭氧采样装置3细菌定量杀灭试验用器材与培养基见

42.

1.

1.7,

2.

1.

1.9o脊髓灰质炎病毒灭活试验用试液、培养基和器材见

52.

1.

1.10o温度与湿度计6塑料杯7500ml水流量计8lL/min~10L/min不锈钢网9臭氧浓度测定用臭氧分析仪和化学滴定法用试剂、器材等10臭氧浓度测定

8.3臭氧浓度的测定方法分为化学滴定法和仪器测定法仪器测定法按仪器使用说明书要求进行通过式臭氧消毒设备1测定水样流出消毒设备后臭氧浓度由高到低的衰变曲线测定时，若出水流量可调，设个流量其中应3包括该设备的最大流量和最小流量，若出水流量不可调，则按说明书要求设个流量，各流量水样流出消毒设1备后，即刻测定水样中臭氧含量，然后再将水样放水浴中，设个个时间段，分别测定水样中臭氧含20℃5〜6量，并绘制臭氧浓度衰变曲线暴气式臭氧消毒设备2测定一定容量的水体中臭氧浓度由低到高，直到臭氧浓度达饱和时的浓度变化曲线按说明书要求,加入规定容量的水样，通入臭氧气体，设个个时间段应测出臭氧浓度达饱和时的最短时间，分别测定水样5〜6中臭氧含量，并绘制臭氧浓度变化曲线杀灭微生物试验操作程序

8.4按臭氧设备制备臭氧水消毒剂的方式分为暴气式与通过式两类暴气方式臭氧消毒设备制备臭氧水消毒剂的杀灭微生物试验1

①按所示相关方法制备金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种芽抱、白色念珠菌、黑曲霉抱子的菌片必要时，可增设其他试验微生物

②有专用容器者，按说明书要求向专用容器内加入规定容量的无菌蒸储水无专用容器者，用容量23000ml的烧杯，盛装无菌蒸偏水样，调水温至3000ml20℃±2℃若无专用容器但需在更大容量的水样中进行试验者，示消毒设备状况，按使用说明书要求调整水样用量，并调水温至20℃±2℃

③将不锈钢网放盛水容器底部中央，染菌布片放不锈钢网表面，染菌布片上再盖一不锈钢网片

④连接微孔扩散装置与臭氧气源出口，开启臭氧消毒设备，开始消毒处理

⑤待臭氧暴气浸泡消毒至规定作用时间第一个作用时间应不少于水中臭氧达饱和浓度所需时间，取出样片，移入含中和剂溶液的试管中，中和进行活菌计菌5ml10min,

⑥试验同时设阳性对照和阴性对照组，阳性对照用无臭氧气体代替臭氧气体，在水样体积和暴气量等相同条件下，将染菌样片暴气浸泡至最长作用时间，取出样片，进行活菌计数

⑦试验重复次3

⑧根据各组杀灭对数值计算结果，确定杀灭细菌繁殖体，真菌或细菌芽泡的杀灭对数值为所需最低有效3浓度和相应的作用时间通过式臭氧消毒设备制备的臭氧水消毒剂流动载体浸泡杀灭微生物试验2

①按所示相关方法制备金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种芽抱、白色念珠菌、黑曲霉狗子的菌片必要时，可增设其他试验微生物

②将臭氧水消毒设备开机使臭氧水中臭氧含量稳定5min,

③取不锈钢网放盛水容器底部中央，染菌布片放不锈钢网表面，染菌布片上再盖一不锈钢网片用臭氧水消毒剂沿容器壁流下，流动浸泡消毒至说明书规定作用时间，取样检验

④试验同时设阳性和阴性对照阳性对照组用自来水代替臭氧水消毒剂，在相同流量下流动浸泡至最长作用时间取出样片，进行活菌计数

⑤取本次试验同批的和培养基接种培养基培养，作为阴性对照PBS

⑥试验重复次3

⑦根据各组杀灭率计算结果，确定杀灭细菌繁殖体、真菌或细菌芽泡的杀灭对数值为所需最低有效浓度3和相应的作用时间脊髓灰质炎病毒灭活试验

8.5按所示方法制备脊髓灰质炎病毒悬液若无特殊要求，用玻片为载体1将制备的脊髓灰质炎病毒玻片加到无菌试管中，使带有病毒的一面向上2将臭氧水消毒设备开机使臭氧水中臭氧含量稳定35min,向含有脊髓灰质炎病毒玻片的试管中加入的臭氧水消毒剂，浸泡消毒至规定作用时间，取出玻片

41.0ml载体，移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒滴度1ml将未消毒的染有脊髓灰质炎病毒的玻片，加到的无菌蒸储水中，浸泡至规定消毒作用的最长时间5LOml取出玻片载体，移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒滴度，作1ml为阳性对照阴性对照，用不含脊髓灰质炎病毒的完全培养基作为阴性对照，以观察培养基有无污染，细胞是否生长6良好试验重复次73根据各组的平均病毒感染滴度，分别计算其对病毒的灭活对数值8TCID50评价规定

8.6对细菌及其芽胞和真菌，在3次试验中，所设阳性对照组的回收菌量在5x105cfu/片〜5x106cfu/片，阴性对照无菌生长，试验组中每次试验细菌及其芽胞和真菌的杀灭对数值均

23.00；对脊髓灰质炎病毒，在3次试验中，所设阳性对照组，脊髓灰质炎病毒滴度达阴性对照细胞无污染，试验组中每次试验病毒滴度105TCID50,下降个对数值者，该组作用时间可作为实验室试验消毒合格的最短作用时间4若阳性或阴性对照组的结果与上述要求不符，试验作废，重新进行注意事项

8.7对试验结果有怀疑时，可在试验时同步进行臭氧浓度测定，以便作进一步的分析注意事项

1.6干热灭菌效果检测，应使用枯草杆菌黑色变种芽抱，不得使用嗜热脂肪杆菌芽抱，因在干热条件下，前1者对干热的抗力较后者为强灭菌柜柜室容积和加热装置的变化，均可影响消毒效果，故在这方面的设计有所变动时，杀菌效果应重2新测定灭菌效果观察，样本检测稍有污染即可将灭菌成功的结果全部否定，故试验时必须注意防止环境的污染3和严格遵守无菌操作技术规定柜室内满载与非满载，结果差别较大，故正式试验时必须在满载条件下进行4红外线消毒碗柜2目的

2.1检测红外线消毒碗柜下简称消毒碗柜对餐饮具的消毒效果，以验证其杀灭微生物性能是否符合设计规定试验器材

2.2大肠杆菌悬液18099脊髓灰质炎病毒悬液1染菌玻片载体必要时可随消毒对象，增用或改用其他载体2lOmmxlOmm活菌培养计数所需器材见

42.

1.

1.3o病毒灭活试验所需试液、培养基与器材见

52.

1.

1.10o食饮具种类与数量按使用说明书规定，用于装填消毒碗柜进行满载试验6多点温度测定仪7柜内温度测定

2.3将温度测定仪的多个探头，分别放于消毒碗柜每层的内、外两点大型碗柜可在内、中、外点放置，摆3放食饮具至使用说明书规定的最高装载量满载关闭柜门，开启电源，按消毒碗柜规定程序进行消毒每记录各点的温度试验重复次，计算各点不同时间的平均温度，并以表列出大肠杆菌杀灭试验3min,

32.4按所示方法制备大肠杆菌菌片载体为玻片1在消毒碗柜满载的情况下，将干燥大肠杆菌菌片置无菌平皿内，每平皿放片，勿重叠在消毒碗柜每22层的内、外两个点各放一含菌片的平皿大型碗柜可在内、中、外各放一平皿，打开平皿盖关闭柜门，开启电源，按消毒碗柜原设计程序进行消毒消毒完毕，按说明书规定的时间打开柜门，取3出平皿将菌片移入含试管内，按所示方法进行活菌培养计数5ml PBS在上述消毒试验时，将未消毒菌片，放置室温下，当消毒组试验完毕后，取该菌片进行活菌培养计数，4作为阳性对照另将同批培养基与等培养，作为阴性对照PBS试验重复次，其平均杀灭率应按的规定进行计算和表达53在次试验中，每次阳性对照回收菌数均达片片，阴性对照无菌生长，阳性和阴性635xl5cfu/〜5xl6cfu/对照组结果若不符上述要求，试验作废，重新进行脊髓灰质炎病毒灭活试验

2.5按所示方法制备脊髓灰质炎病毒悬液若无特殊要求，用玻片为载体1在消毒碗柜满载的情况下，将干燥的染有脊髓灰质炎病毒的载体置无菌平皿内，每平皿放片,勿重叠22在消毒碗柜每层的内、外两个点各放一含染有脊髓灰质炎病毒载体的平皿大型碗柜可在内、中、外各放一平皿，打开平皿盖关闭柜门，开启电源，按原规定程序进行消毒消毒完毕，按说明书规定的时间，打开柜门，取出平皿3将载体移入含细胞维持液的试管中振荡洗涤后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒的感染滴度1ml阳性对照，将未消毒的染有脊髓灰质炎病毒的载体片，放置于消毒碗柜外室温下待试验组消毒完42毕后，立即将载体移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒1ml的感染滴度脊髓灰质炎病毒的感染滴度应2105TCID50阴性对照，用不含脊髓灰质炎病毒的完全培养基作为阴性对照，以观察培养基无污染，细胞是否生长良5好试验重复次63根据各组的平均病毒感染滴度，分别计算其对病毒的灭活指数，病毒的灭活指数应达个对数7TCID504值评价规定

2.6对消毒碗柜实验室试验所得消毒效果的评价，应以对微生物的杀灭效果为准当所测结果均达到以下要求者可判为合格柜内最低温度点达到并可持续以上1120C,15min对大肠杆菌，每次试验，阳性对照组回收菌数均达片片，阴性对照无菌生长，对25xl5cfu/〜5Xl6cfu/大肠杆菌的杀灭对数值，各点均为消毒合格

23.003对脊髓灰质炎病毒，每次试验，培养基无污染,细胞生长良好脊髓灰质炎病毒感染滴度TCID50^105,灭活对数值》可判为消毒合格

4.00o注意事项

2.7消毒碗柜内满载与非满载，结果可有相当大差别，故正式试验必须在满载条件下进行1不同大小的消毒碗柜，柜内装有红外线灯的功率或安装支数，均可影响消毒效果，故在这方面的设计有2所变动时，应重新测定大肠杆菌杀灭试验注意事项见3脊髓灰质炎病毒灭活试验注意事项见4微波灭菌柜3目的

3.1测定微波灭菌柜下简称灭菌柜对微生物的杀灭效果，以验证其消毒或灭菌性能是否符合原设计规定试验器材

3.2金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、龟分枝杆菌1ATCC65388099ATCC

15442、枯草杆菌黑色变种芽胞等细菌或芽泡悬液ATCC93326ATCC9372染菌载体以布片或玻片为代表，必要时可随灭菌对象，增用或改用其他载体2lOmmxlOmm,微波漏能测试仪检测灭菌柜微波有无泄漏3营养肉汤培养基见附录4A活菌培养计数所用器材见

32.

1.

1.2o使用说明书中规定的处理的物品装填灭菌柜，使达满载5细菌及其芽孑包和真菌杀灭试验操作程序

3.3按所示相关方法制备试验用细菌及其芽抱和真菌菌片若无特殊要求，菌片以布片为载体1每一牛皮纸小袋装个菌片lOmmxlOmm2按实用情况，在灭菌柜内模拟摆放常规处理物品至使用说明书中规定的最高装载量满载将试验菌2片放于柜室各层中央和四角的物品中间，每层共放置袋放入试验菌片前，按使用方法，做预湿处理柜室5容量小者可适当减少放置菌片数量菌片布放完以后，关闭柜门，进行微波照射至预定时间，停止照射，打开柜门，取出物品和试验菌3片消毒试验时，按要求的方法，作定量杀菌效果的检测灭菌试验时，将取出的试验菌片移种于营养肉4汤中，置温箱内作定性培养培养若仍无菌生长，判为阴性对难以判断的肉汤管，取其中37℃7d,

0.2ml悬液接种营养琼脂平板，用灭菌棒涂匀，置培养箱培养后涂片染色显微镜下观察菌落形态，或进L37℃48h一步做其他试验，判断生长的是否为试验菌若为非试验菌，应重新进行试验测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组菌片对照与阴性对照组培养基对照5定量阳性对照组，将同批试验用的菌片放在室温下，待消毒或灭菌试验组达规定作用时间后，立即将6该菌片片分别移入含试管中，各振荡次取洗液按所示方法进行活菌培养计数

25.0mlPBS80定性阳性对照组，将同批试验用的菌片放在室温下，待灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该批试7验用的菌片片，分别接种于营养肉汤培养基，放入培养箱中作定性培养，观察细菌生长情况

25.0ml阴性对照组，在灭菌试验中，将同批试验用的菌片片，分别接种于营养肉汤培养基，同时将

825.0ml未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长在消毒试验中，则应对所用中和剂、稀释液和培养基进行无菌检测，观察有无细菌污染试验重复次95在次试验中，阳性对照组各次试验样片的回收菌量均应在片片；定性阳性对照1055xl05cfu/〜5xl6cfu/组，细菌生长良好；阴性对照组样本应无菌生长阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行评价规定

3.41在5次消毒试验中，每次试验中的阳性对照菌片，检测回收菌量均应达5xl5cfu/片〜5x106cfu/片，阴性对照组应无菌生长，各次试验的杀灭对数值均可判为消毒合格

23.00在次灭菌试验中，每次试验中的定量阳性对照组，检测回收菌量均达片片；定性255xl5cfu/〜5xl6cfu/阳性对照组，细菌生长良好阴性对照组样本应无菌生长所有试验菌片都无细菌生长时，可判为灭菌合格注意事项

3.5微波强弱受电压影响很大试验时，应注意电压是否符合说明书规定值波动较大时，应使用稳压电源1灭菌柜在消毒棉织品、金属、橡胶管等物品时，一定事先摸索被消毒物品适宜的预湿水量，一方面可防2止棉织品烧焦，金属物品对磁控管的破坏；一方面可提高其杀菌效果微波杀菌效果与样本的含水量密切有关在使用中规定需预湿者，试验时亦必须预湿，不可省略3微波消毒金属物品时，需用湿布将其包裹，特别是对金属器械的尖端部分，以防因尖端放电损坏磁控管4测试人员长时间受微波照射，对健康有害试验时必须穿戴专用的防护用具测试的灭菌柜应先用微波5漏能测试仪检测有无微波泄漏紫外线灯4目的

4.1测定紫外线灯包括双灯管组合灯具辐照强度及对微生物的杀灭作用，以验证其杀菌性能是否达到合格标准试验器材

4.2金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种1ATCC65388099ATCC15442芽苑、白色葡萄球菌空气消毒时用、等细菌及其芽泡和真菌悬液ATCC9372I8032,染菌载体以玻片为代表，必要时可随消毒对象，增用或改用其他载体210mm X10mm,紫外线照度计在计量标定有效期内，下简称照度计3紫外线灯测定架测定时，紫外线灯固定于测定架顶端顶端高可上下移动下简称测定架42m,稳压器5220V细菌及其芽胞和真菌杀灭试验所需器材见

62.

1.

1.7,

2.

1.

1.9o辐照强度测定

4.3将待测紫外线灯管固定于测定架，调节距离使灯管距其下方垂直中心放置照度计处11m2开启紫外线灯5min后，用照度计在灯管下方垂直距离1m的中心处测量其辐照度值|iW/cm2o测量时，电压应稳定在3220Vo普通型或低臭氧型直管紫外线灯在灯管下方垂直的中心处，新灯管的辐照度值应430W,1m290|iW/cm2使用中的灯管，可在原装置处进行测定测定位置仍在灯管下方垂直距离的中心处使用中灯管的51m辐照度值应低于此值者应予更换270|iW/cm2,多灯管组合灯具的测定方法和合格标准，同单支灯管6对异型非直管型、高强度型，或非功率等灯管的检测距离和辐照度值合格标准，随产品用途和730W使用方法而定原则上，应不低于产品使用说明书注明的辐照度值，并按其推荐剂量［即辐照度值乘以照射时间⑸］进行杀菌试验，证明能满足应用所需效果者可判为实验室测试合格辐照强度检测，每次鉴定抽查支灯管，每支灯管重复测定次各次数据均达标准可判辐照强度合8103格细菌及其芽泡和真菌杀灭效果的测定

4.4按所示方法制备细菌及其芽抱和真菌菌片菌片以玻片为载体

12.LL22试验时，确定菌片照射位置若无特殊要求，30W灯管应在灯管下方垂直距离1m的中心处将菌片平置于无菌平皿中，勿重叠平皿放于测定架预先确定的照射位置上进行照射3照射分为个时间组各组时间的设置应使能测出将试验细菌及其芽胞和真菌杀灭对数值所需的

4323.00最低剂量，否则应调整时间，重新试验，直至取得所需结果为止将照射后样本送实验室进行活菌培养计数见的测定

52.LL2测试中，应同时设立阳性对照组菌片对照与阴性对照组培养基对照6阳性对照组，以试验用的同批菌片置室温下，待试验组消毒完毕后，立即将该批菌片片分别放入含72试管中，电动混匀器震荡或各振敲次取洗液按所示方法进行活菌培养计数

5.0ml PBS20s80阴性对照组，以同次实验用培养基或接种培养基培养，观察有无细菌生长8PBS试验重次每次试验中的阳性对照菌片，检测回收菌量均应在片片，阴性对照组935xl5cfu/〜5xl6cfu/应无菌生长，各次试验对细菌及其芽泡和真菌的杀灭对数值均该照射时间可判为消毒合格所需照射的

23.00时间阳性或阴性对照组结果若不符上述要求，该次试验作废，重新进行对异型非直管型、高强度型，或非功率等灯管的照射距离，随产品用途和使用方法而定1030W评价规定

4.5在次消毒试验中，对细菌及其芽泡和真菌，每次试验中的阳性对照菌片，检测回收菌量均应达35x105cfu/片片，阴性对照应无菌生长，各次试验的杀灭对数值均三可判为消毒合格〜5x106cm/3臭氧产生量的测定

4.6紫外线灯产生的臭氧量不同可影响杀菌效果和使用的安全，故应测定臭氧浓度以便进行综合考虑臭氧浓度测定方法见本规范理化鉴定技术检测条件应以产品使用说明中规定的使用方法、面积或容积和时间为准，进行现场或模拟现场测定臭氧浓度应写明于使用说明书中，低臭氧紫外线灯产生的臭氧浓度，应不超过国家规定的工作场所安全浓度

0.3mg/m3o有效使用期的测定

4.7将灯管装设于测试架上，通电连续照射每周测试一次辐照度值，直至低于70iW/cm2时为止该样本连续照射的时间（h）,即为其有效使用时间（h）随机抽样，重复测试5支灯管，取其最低值注意事项

4.8（）测试前应先用酒精棉球擦除灯管上的灰尘和油垢，以免影响紫外线的照射强度1（）杀菌试验时，应使紫外线直接照射拟消毒表面，否则不能反映该剂量真实的杀菌效果2（）在紫外线灯下工作时，勿直视灯管，并穿戴防护眼镜、防护服、手套等，以减少对测试人员的伤害3在有人工作环境中，空气中臭氧浓度不得超过

0.3mg/m3（）测定辐照度值或进行杀菌试验时，应保持室内洁净无尘4紫外线消毒箱5目的

5.1测定紫外线消毒箱（下简称消毒箱）对物体表面微生物的杀灭效果，以验证其杀菌性能是否符合原设计规定试验器材

5.2（）金黄色葡萄球菌（）、大肠杆菌（）、铜绿假单胞菌（）、枯草杆菌1ATCC65388099ATCC15442黑色变种（ATCC9372）芽抱、白色念珠菌（ATCC10231）、龟分枝杆菌脓肿亚种（ATCC93326）等悬液和脊髓灰质炎病毒悬液

（2）染菌载体（10mmx10mm,以玻片为代表，必要时可随消毒对象，增用或改用其他载体）

（3）紫外线照度计（在计量标定有效期内，下简称照度计）

（4）紫外线灯测定架［见

4.2

（3）］

（5）细菌及其芽抱、龟分枝杆菌和真菌杀灭试验所需器材（见

2.

1.

1.7,

2.

1.

1.8,

2.

1.

1.9）o

（6）脊髓灰质炎病毒灭活试验所需试液、培养基和器材（见

2.LL10）

（7）使用说明书中规定消毒箱可处理的物品（装放于消毒箱，使达满载耍求）紫外线照射强度测定

5.3打开消毒箱的盖或门，将内装紫外线灯管取下，在紫外线灯测定架上按测定其照射强度的辐照度值，以确定是否与产品质量标准或企业标准中规定的相同必要时，以与箱门（或盖）一样大小的铝板，用胶带固定于消毒箱的门框（或消毒箱盖）上铝板中央处钻一直径为小圆孔，开启箱内紫外线灯，照射待稳15mm5min,定后，通过铝板上小圆孔用照度计测定射出紫外线的辐照度值（（iW/cn）

5.4对微生物杀灭效果的测定

（1）细菌及其芽抱、龟分枝杆菌和真菌杀灭效果的测定

①按所示相关方法制备细菌及其芽胞和真菌菌片菌片以玻片为载体

②每次试验只测试一种微生物，以防交叉污染试验用样片每片为一组，平放于无菌平皿中，勿重叠2箱内容积过小时，可将试验细菌及其芽狗和真菌直接涂染于所设计消毒的物品表面进行试验,每件为一组2

③根据消毒箱容积的大小，放入一定数量装有样片的平皿，或直接涂染的样本，但消毒箱内应同时将所设计消毒的物品摆放至使用说明书中规定的最高装载量（满载）

④关闭消毒箱门（或盖），打开紫外线灯，照射至规定时间

⑤取出样本，按所示方法进行活菌计数对白色念珠菌的杀灭试验，用沙堡琼脂培养基，对黑曲霉菌的杀灭试验，用胰蛋白陈琼脂培养基，其他方法和步骤均与细菌杀灭试验相同

⑥阳性对照组，以试验用的同批菌片置室温下，待试验组菌片消毒达规定作用时间后，立即将该批菌片2片分别放入含试管中，各振荡下取样液按所示方法进行活菌培养计数

5.0ml PBS80

⑦阴性对照组，用同批次试验用培养基或接种培养基培养，观察有无细菌生长PBS

⑧试验重复次阳性对照菌片每次试验回收的含菌量均应在（）片（）片，阴性对照组35xl5cfu/〜5xl6cfu/样本应无菌生长，各次试验对细菌及其芽泡和真菌的杀灭对数值均该照射时间可判为消毒合格所需照

23.00射的时间阳性或阴性对照组结果若不符上述要求，该次试验作废，重新进行脊髓灰质炎病毒灭活试验2

①按所示方法制备脊髓灰质炎病毒悬液若无特殊要求，用玻片为载体

②每次试验片脊髓灰质炎病毒样片为一组，平放于无菌平皿中，勿重叠箱内容积过小时，可将脊髓灰2质炎病毒直接涂染于所设计消毒的物品表面进行试验，每件为一组2

③根据消毒箱容积的大小，放入一定数量装有样片的平皿，或直接涂染的样本，但消毒箱箱内应同时将所设计消毒的物品摆放至使用说明书中规定的最高装载量满载

④关闭消毒箱的门或盖，打开紫外线灯，照射至规定时间

⑤将照射后将脊髓灰质炎病毒样片移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊1ml髓灰质炎病毒的滴度

⑥将未消毒的脊髓灰质炎病毒样片片，放置于消毒箱外室温下待试验组消毒完毕后，立即将脊髓灰质2炎病毒样片移入含细胞维持液的试管中振荡后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒的感染滴度，1ml作为阳性对照

⑦阴性对照，用不含脊髓灰质炎病毒的完全培养基作为阴性对照，以观察培养基有无污染，细胞是否生长良好

⑧试验重复次3

⑨根据各组的平均病毒的感染滴度分别计算其对病毒的灭活对数值TCID50,评价规定3在次消毒试验中，对细菌及其芽泡和真菌，每次试验中的阳性对照菌片，检测回收菌量均应达35xl5cfu/片片，阴性对照组样本应无菌生长，各次试验的杀灭对数值均对脊髓灰质炎病毒，培养基〜5xl6cfu/N

3.00无污染，细胞生长良好，脊髓灰质炎病毒的感染滴度灭活对数值可判为消毒合格TCID50NIO*

24.00注意事项

5.5试验时，应注意箱内物品有无未被紫外线直接照到处如被箱内支架遮挡如实用中拟消毒物品有可能1处于该位置，在染菌样片布点时应考虑观察该部位的消毒效果其他同

24.6o环氧乙烷灭菌器6目的

6.1测定环氧乙烷灭菌器下简称灭菌器对细菌芽泡的杀灭能力，以验证其灭菌性能是否符合原设计规定试验器材

6.2枯草杆菌黑色变种芽抱菌片1ATCC9372含菌量要求为片片按活菌培养计数结果计在环氧乙烷量为温度5xgcfw〜5x106cfw600mg/L±30mg/L,为相对湿度为条件下，菌片上芽泡存活时间应＞杀灭时间值为54c±2℃,60%±10%

7.8min,W58min,D

2.6min〜

5.8min染菌载体以布片为代表，必要时可随灭菌对象，增用或改用其他载体210mm xl0mm,聚乙烯塑料袋封装菌片用，大小为厚360mm x40mm,

0.2min~

0.4mm活菌培养计数所需器材见

42.

1.

1.3o使用说明书中规定灭菌器可处理的物品装填灭菌器，使达满载要求5灭菌试验操作程序

6.3根据试验要求，制备枯草杆菌黑色变种芽泡悬液和菌片菌片放入双层聚乙烯塑料袋内密封包装，每袋1片每次试验用袋220将灭菌器上、中、下层，每层内、中、外各设一点，共设点每点物品中间布放袋，共需袋239118试验菌片另将一袋片菌片放置在室温条件下作为阳性对照2按使用说明书所规定的环氧乙烷浓度、作用时间、柜内的温度和相对湿度，在满载条件下进行环氧乙烷3灭菌处理满载用物品，随灭菌器用途而定处理完毕，取出菌片，分别移种于营养肉汤培养基中，置5ml培养箱内培养，后观察最终结果定性培养检测37c7d对难以判断结果的营养肉汤管，取其中悬液接种营养琼脂平板，用无菌棒涂抹均匀，置培养

0.2ml L37℃箱内培养后涂片染色，显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，判断有无生长或生长的是否为试48h验菌若为非试验菌，则应重新进行试验测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组与阴性对照组4定量阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待消毒或灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片5片分别放入含试管中，各振敲打次取洗液按所示方法进行活菌培养计数

25.0mlPBS80定性阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片片，62分别接种于营养肉汤培养基，放入温箱中作定性培养，观察有细菌生长情况

5.0ml阴性对照组，以同批次试验用未染菌样片片，分别接种于营养肉汤培养基，同时将未接种过的

725.0ml营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长试验重复次85在次试验中，每次试验中的阳性对照菌片，回收菌量均应在片片；定性阳性对照955xl05cfu/〜5xl6cfu/组，细菌生长良好；阴性对照应无菌生长阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行评价规定

6.5在5次灭菌试验中，每次试验中的定量阳性对照组，检测回收菌量均达5x105cfu/片〜5xl6cfu/片；定性阳性对照组，细菌生长良好阴性对照应无菌生长所有试验菌片全部无细菌生长时，可判为灭菌合格注意事项

6.6温度和相对湿度对环氧乙烷气体杀菌效果影响较大，故应严格控制试验中的有关条件1环氧乙烷液体可溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，不可将其液体滴落于此类物品上环氧乙烷不论液体或气体，2均可损坏赛璐璐制品，试验时应予注意环氧乙烷易燃易爆，操作现场应采取防火防爆措施，不得有明火作业及电火花发生3吸入过多环氧乙烷气体，可引起头痛，呕吐等中毒症状，严重者可致肺水肿等工作环境中应有良好的4通风在每日8h工作中，环氧乙烷浓度应不超过

1.82mg/m3Ippm,15min工作中暴露浓度不超过

9.1mg/m3如出现中毒症状，需迅速离开现场轻者呼吸新鲜空气，直到症状消除；重者应及时送医院治疗

5.0ppmo臭氧消毒柜7目的

7.1测定臭氧消毒柜下简称消毒柜对物体表面上微生物的杀灭效果，以验证其杀菌性能是否符合原设计规定试验器材

7.2金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌1ATCC65388099ATCC15442ATCC悬液和脊髓灰质炎病毒悬液10231染菌载体以布片或玻璃片为代表，必要时可随消毒对象，增用或改用其他载体210mm x10mm,臭氧采样装置和浓度分析仪3细菌定量杀灭试验用器材见

42.

1.

1.7,

2.

1.

1.9o脊髓灰质炎病毒灭活试验用试液、培养基和器材见

52.

1.

1.10o温度与湿度计6臭氧浓度测定

7.3仪器测定:臭氧浓度可用臭氧分析仪测定操作按仪器使用说明书规定进行1化学滴定法测定:参考本规范理化鉴定实验技术2杀灭微生物试验操作程序

7.4臭氧消毒柜的臭氧发生器臭氧发生量一般不可调，故试验时设个作用时间组［时间分组见］

32.

1.

1.

7.3lo细菌和真菌杀灭试验1

①按所示相关方法制备金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉抱子的菌片必要时，可增设其他试验微生物

②因臭氧在柜内扩散慢，分布不易均匀，故物品在柜内应摆放至使用说明书中规定的最高装载量满载，以尽量接近实际应用时的情况

③以片菌片一组，置一无菌平皿中，勿重叠试验时，将放有菌片的平皿盖打开，分层布放，每层内、2中、外各点分别放一组样本

④按照使用说明书要求，调节柜内温度与相对湿度，并记录备查，然后开启臭氧发生器进行消毒

⑤消毒至规定时间，取出菌片，按所示方法进行活菌培养计数对白色念珠菌的杀灭试验，用沙堡琼脂培养基，对黑曲霉菌的杀灭试验，用麦芽浸膏琼脂培养基，其他方法和步骤均与细菌杀灭试验相同因臭氧气体熏蒸，载体吸收的量少、分解快，可不必进行去除残留臭氧的处理每组试验重复次3

⑥将未消毒的菌片片，放置于消毒碗柜外室温下待试验组消毒完毕后，同时进行活菌培养计数检测2取本次试验同批的接种培养基培养，作为阴性对照PBS［对未固定装于消毒箱内的臭氧发生器如冰箱臭氧消毒器，其杀菌效果鉴定，可按其用途，在相应的密闭柜内进行柜的大小应与所设计的杀菌有效范围相近］脊髓灰质炎病毒灭活试验2

①按所示方法制备脊髓灰质炎病毒悬液若无特殊要求，用玻片为载体

②在消毒碗柜满载的情况下，将干燥的染有脊髓灰质炎病毒的载体置灭菌平皿内，每平皿放片，勿重叠2在消毒碗柜每层的内、外两个点各放一含染有脊髓灰质炎病毒载体的平皿大型碗柜可在内、中、外各放一平皿，平皿盖打开

③关闭柜门，开启电源，按原规定程序进行消毒消毒完毕，按说明书规定的时间，打开柜门，取出平皿将载体移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒滴度1ml

④将未消毒的染有脊髓灰质炎病毒的载体片，放置于消毒碗柜外室温下待试验组消毒完毕后，立即将2载体移入含细胞维持液的试管中振打后，取样按所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒滴度，作为阳性对照1ml

⑤阴性对照，用不含脊髓灰质炎病毒的完全培养基作为阴性对照，以观察培养基有无污染，细胞是否生长良好

⑥试验重复次3

⑦根据各组的平均病毒感染滴度TCID，分别计算其对病毒的灭活对数值O5评价规定

7.5对细菌及其芽泡和真菌，在次试验中，所设阳性对照组回收菌量在片片，阴性对照35Xl5cfu/〜5xl6cfu/无菌生长，试验组中每次试验细菌及其芽泡和真菌的杀灭对数值均23；对脊髓灰质炎病毒，在3次试验中，所设阳性对照组，脊髓灰质炎病毒滴度达1O5TCID5O,阴性对照细胞无污染，试验组中每次试验病毒滴度下降4个对数值者，该组作用时间可作为实验室试验消毒合格的最短作用时间若阳性或阴性对照组的结果与上述要求不符，试验作废，重新进行注意事项

7.6对试验结果有怀疑时，可在试验时同步进行臭氧浓度测定，以便作进一步的分析1每次试验完毕，应充分排除消毒柜内的臭氧气体，勿使有臭氧残留，以免影响随后的试验2。