CCK8检测细胞增殖毒性的原理及注意事项

CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及留意事项

一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理憾3R孙H90JN-N5OjHWST4Viable cell（简称）试剂可用于简便而精确的细胞增殖和毒性Cell CountingKit-8CCK-8分析其基本原理为该试剂中含有【化学名（-甲氧基-硝基WST-82-2-4苯基）（-硝基苯基卜（-二磺酸苯）四唾单钠盐】，它在电子载345-2,4-2H-体甲氧基-甲基吩嗪硫酸二甲酯（）的作用下被细胞中1--5411-MethoxyPMS的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（）生成的甲Formazandye o瓒物的数量与活细胞的数量成正比因此可利用这一特性干脆进行细胞增殖和毒性分析用途药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK8的优点・运用便利，省去了洗涤细胞，不须要放射性同位素和有机溶剂;・法能快速检测；CCK-8・法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK-8・法的重复性优于法；CCK-8MTT・法对细胞毒性小；CCK-8・细胞活性检测试剂中为瓶溶液，毋需预制，即开即用CCK-81CCK8的缺点・与法相比，和的价格比较贵MTT CCK8XTT・试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培育基颜色接近，不留意的话CCK8简洁产生漏加或多加与以往的增殖/毒性测定试剂相比较检测方法MTT法XTT法WST-1法CCK8法差（需加有甲腹产物的水好好好机溶剂溶溶性解）产品性状粉末瓶溶液溶液瓶溶液21运用方法配成溶液现配现用即开即用即开即用后运用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm细胞毒性高，细胞形很低，细胞很低，细胞很低，细胞态完全消形态不变形态不变形态不变逝试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以特殊适合特殊适合特殊适合便捷程度一般便捷便捷特殊便捷

二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法试验一细胞增殖分析、制备细胞悬液细胞计数、接种到孔板中依据合适的铺板细胞数，1296每孔约细胞悬1003液，同样的样本可做个重复

3、℃培育箱中培育细胞接种后贴壁大约须要培育小时，假如不须要3372-4贴壁，这步可以省去、加入由于每孔加入量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上410ulCCK8CCK8而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培育板以帮助混匀或者干脆配置含的培育基，以换液的形式加入10%CCK

8、培育小时:细胞种类不同，形成的的量也不一样假如显色51-4Formazan不够的话，可以接着培育，以确认最佳条件特殊是血液细胞形成的Formazan很少，须要较长的显色时间（小时）5-

6、测定吸光度建议接受双波进步行测定，检测波长参比6450nm450-490nm,波长600-650nm试验二细胞毒性分析、制备细胞悬液细胞计数

1、接种到孔板中依据合适的铺板细胞数，每孔约细胞悬液，同样2961003的样本可做个重复

3、℃培育箱中培育细胞接种后贴壁大约须要培育小时，假如不须要3372-4贴壁，这步可以省去、加入不同浓度的毒性物质

4、℃培育箱中培育加入毒性物质的培育时间，要看毒性物质的性质和细537胞的敏感性，一般要依据细胞周期来确定，至少要一代以上的时间、加入由于每孔加入量比较少，有可能因试剂沾在孔壁610UICCK8CCK8上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培育板以帮助混匀、培育小时:细胞种类不同，形成的的量也不一样假如显色71-4Formazan不够的话，可以接着培育，以确认最佳条件特殊是血液细胞形成的Formazan很少,须要较长的显色时间（小时）5-

6、测定吸光度建议接受双波进步行测定，检测波长8450nm参比波长450-490nm,600-650nm注.若短暂不测定值，可以向每孔中加入的溶液或者1%溶0D HCLw/v SDS液,并遮盖培育板避光保存在室温条件下小时内测定，吸光度不会24发生变更.假如待测物质有氧化性或还原性的话,可在加之前更换簇新培育基CCK8（除去培育基，并用培育基洗涤细胞两次，然后加入新的培育基），去掉药物影响当然药物影响比较小的状况下，可以不更换培育基，干脆扣除培育基中加入药物后的空白吸取即可

三、CCK8检测细胞增殖/毒性的留意事项当运用标准孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为个/孔（・96L0001003培育基）检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此举荐接种量不低于2,500个/孔（培育基）100nl.酚红和血清对法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底CCK8的吸光度而消去可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞在细胞增殖试验每次・CCK8测定的过程中须要避开细菌污染，以免影响结果在℃下能够保存至少个月,在下避光可以保存年・CCK-80-56-20°C1当在培育箱内培育时，培育板最外一圈的孔最简洁干燥挥发，由于体积・不精确而增加误差一般状况下，最外一圈的孔只加培育基，不作为测定孔用在培育基中加入培育确定的时间，测定的吸光度即为空・CCK8,450nm白比照在做加药试验时，还应考虑药物的吸取，可在加入药物的培育基中加入培育确定的时间，测定的吸光度作为空白比照CCK8,450nm金属对显色有影响当终浓度为的氯化亚铅、氯化铁、硫・CCK-81mM酸铜会抑制、、的显色反应，使灵敏度降级假如终浓度5%15%90%是的话,将会抑制10mM100%悬浮细胞由于染色比较困难，一般须要增加细胞数量和延长培・育时间。