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染色方法GUS、染色液的配置1GUS()缓冲液1GUS组分PBS EDTA亚铁氟化钾铁氧化钾Triton-100终浓度(mM)-
100.
50.
50.1%以50mL为例,所需量至50mL50uL50uL50uL50uL【注意】在配置缓冲液前,应配置如下组分的浓缩液:GUS磷酸盐缓冲液()PBS lOOmMPH=
7.0配置为的浓缩液EDTA10mM/mL亚铁氟化钾配置为的浓缩液
0.5mM/mL铁氟化钾配置为的浓缩液
0.5mM/mL()浓缩液2GUS在管称取粉末,加入少量或二甲基甲酰胺助溶(一般溶解EP lOmgX-gluc DMSON,N-lOmg粉未约二甲基甲酰胺)配置为的浓缩液,然后用缓冲液配成终浓度为10~20ul10mg/ml GUS的染液,避光保存,现配现用;lmg/ml GUS()工作液3GUS按照以下比例配置即可,现配现用,℃最多存放天47工作液配置总量()组分GUS mL15102050GUS浓缩液(uL)100500100020005000GUS缓冲液(mL)
0.
94.
591845、染色步骤2()取材将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片,放到离心管;1l.5ml【注意】染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异对于拟南芥的根/花/叶片,以及烟草幼苗的根,可以不做任何预处理直接进行染色;但是,对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片()再进行染色而更大的组织样品,需用真空渗透法来促〜l-3mm进染色工作液渗入细胞()染色加入适量体积现配好的染色工作液,以完全覆盖材料为准铝箔纸包好,室温孵2育过夜同时设置阴性和阳性对照实验;3h-()脱色将染色好的材料转入酒精中脱色次,直至阴性对照材料变为白色染370%
2.3GUS色阳性的蓝色斑点非常稳定,不会被酒精脱色()观察大部分染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到,然而,有些材料可能蓝色斑点很4GUS细微,需要显微镜下才能观察到【注意】白色背景上的蓝色斑点即为表达位点GUS。