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编号SOP-ZL016-00页码:1\2传代细胞的冻存与复苏SOP版本号01修订号00机密等级秘密起草人起草日期审核人审核日期颁发部门质量管理部批准人批准日期生效日期分发清单研发部[]质量管理部[]综合管理部[]生产管理部[]市场销售部[]财务部[]
1.目的规范细胞的保存与复苏方法
2.范围各种细胞的保存与复苏
3.职责
3.
1.质量管理部负责本程序的起草
3.
2.质量管理部QC人员负责本程序的操作
4.
3.总经理负责本程序的审批
5.定义无
6.引用标准无
7.材料
8.
1.材料准备
9.
1.
1.DMEM培养基
10.
1.
2.细胞消化液
11.
1.
3.二甲基亚飒
6.
2.仪器设备低速离心机、液氮罐
7.
3.器械、用具细胞冻存管、小试管
8.流程图无
9.内容
10.
1.细胞保存
8.
1.
1.将细胞按常规进行消化
8.
1.
2.将消化好的细胞加入小试管中
8.
1.
3.500-lOOOrpm离心10分钟
8.
1.
4.倒掉上清,加入已配制好的细胞保存液中(含10%二甲基亚碉的细胞生长液)
8.
1.
5.轻轻吹打将细胞悬起,倒入细胞冻存管中
8.
1.
6.做好标记(包括细胞名称、细胞代数、冻存日期)将冻存管放入带绳的纱布袋中
8.
1.
7.将纱布袋放入4c冰箱中预冷2小时
8.
1.
8.再放入-20℃冷冻柜中预冻2小时
8.
1.
9.然后放入液氮中做好记录在绳上做好标记
8.
2.细胞的复苏
8.
2.
1.配制细胞生长液
8.
2.
2.准备一杯40℃左右的温水
8.
2.
3.将准备复苏的细胞管从液氮中取出快速放入40℃左右的温水,使其以最短的时间融化
9.
2.
4.500-1000rpm低速离心10分钟
10.
2.5,倒掉上清,用已配制好的细胞生长液将细胞悬起
10.
6.
6.转入细胞培养瓶中37c培养
10.
6.
7.于次日细胞贴壁后,换掉液体
11.注意事项
11.
6.随时注意观察液氮罐中液氮液面,少于三分之一时及时添加
11.
7.从液氮中取出细胞时,注意不要冻伤
9.
3.把握细胞慢冻快融的原则,细胞复苏后的存活率比较高
10.附录及派生记录
11.
1.无
12.相关文件无
13.修订记录修订号修改内容生效日期。