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标准菌种的使用规定文件编号版次GL-011A/0编制______________________日期____________________审核______________________日期____________________批准____________________日期____________________发放部门或人员口院长口质量负责人口技术负责人□检测室口质控室口内审员口设备管理员□其他文件控制印章受控号_____________生效日期___________修改记录修改处修改内容修改人批准人生效日期IBM对微生物标准菌株进行有效管理,确保标准菌株符合要求,保证检测结果2适用范围适用于标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等3职责
1.1质量负责人负责标准菌株购置计划的审批
3.2实验室主任负责购置计划的审核
4.3微生物检测室工作人员负责标准菌株需求计划的提出和标准菌株的配制、验收、评估、有效储存和正确的使用4工作程序
4.1供应商的选择选择有资质的标准菌株的合格供应商,每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书,来证明所采购的标准菌株是合格的
4.2标准菌株和验收实验室收到标准菌株,首先应进行符合性感官检查,记录菌株号和标准菌株来源途径信息,确保溯源性清楚同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况
4.3冻干标准菌株的复活
4.
3.1开启产品包装先用70%酒精棉擦拭外包装,从凹口处撕开产品外包装,撕掉标签上的拉片,将其贴于菌株保藏管上
4.
3.2复活选择合适的培养基和培养条件(根据生产商说明或有关技术通则)进行复活冻干菌株的传代次数不得超过5代,从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代捏管帽处安甑瓶(仅一次)使其释放水合液体垂直握住安甑瓶并轻拍之,使液体流入含小球的管底通过挤捏压碎小球使其与液体混合,立即将拭子浸于水合液体挤压并旋转拭子,接种于初级培养平板,接种圈的直径约为25mm,用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次,促使分离出单菌落同时吸出部分菌液接种胰蛋白陈大豆肉汤管,副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白陈大豆肉汤管将接种好的平板和管立即进行培养细菌培养温度通常为25℃或37℃多数冻干菌株会在几天后长出,但是少数菌会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍复活后的菌株为F1代
5.
3.3将TSB生长的浓菌液吸
0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出,将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面(副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂)36℃培养24h当作工作菌株,记录为F3代
4.4工作菌株确认方法及依据大肠杆菌的确认依照“SN0169-1992出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法”执行金黄色葡萄球菌的确认依照“SN/T0172-2010进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法”执行沙门氏菌的确认依照“SN0170-1992出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法”执行副溶血性弧菌的确认依照“SN/T0173-2010进出口食品中副溶血性弧菌检验方法”执行
5.5工作菌株的储存
4.
5.1大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌接种于斜面上的可储存在2-8℃的冰箱内
4.
5.2副溶血性弧菌在常温条件下保存
4.
5.3储存期限大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌为3个月
4.6标准菌株的转接
4.
6.1标准菌株的复苏
①菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染
②每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养
4.
6.2标准储备菌株每转接一次须进行镜检确认
4.
6.3工作菌株转接的方法
①、配制营养琼脂培养基(副溶血性弧菌加3%氯化钠)并分装在试管内,121℃高压灭菌15分钟后摆斜面,冷却后备用
②、在无菌条件下,用接种环挑取菌苔至新鲜斜面上作“之”字形划线接种,放置在36c的培养箱内培养24小时
4.7工作菌株的使用
4.
7.1内部质量控制一个月一次阳性对照、培养基每批验收;
4.
7.2外部质量控制能力验证、实验室比对;
4.8工作菌株的期间核查
4.
8.1期间核查的频率每半年对使用标准菌株进行一次期间核查
4.
8.2工作菌株期间核查的方法及依据同工作菌株的确认
3.9标准菌株的废弃
3.
1.1标准菌株如已老化、退化、或变异、污染等,经确认试验不符合的或该菌种已无使用需要的应及时销毁
3.
1.2废弃的标准菌株由部门负责人批准,使用人员放入高压锅内121℃,45min高压灭菌后作为废弃物处理
4.10记录实验室应记录标准菌株的配制、复活、传代、确认等工作内容并定期交文档管理员存档。