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文件修改记录修订版本修订日期修订内容次数002011-02-01A12012-05-25修订分发号(仅适用于控制文件)(仅盖有红色印章的文件才有效)
1.0目的
1.1规定食品中霉菌和酵母菌计数的方法
2.0适用范围
2.1适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数
3.0职责微生物检验员负责按作业指导书进行检验
4.0术语(无)
5.0工作流程图见附录A中A.
16.0内容及要求
6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下
6.
1.1冰箱2℃5℃o〜
6.
1.2恒温培养箱28℃±1℃o
6.
1.3显微镜:lOX-lOOXo
6.
1.4电子天平感量
0.1go
6.
1.5无菌锥形瓶:容量500mL250mLo
6.
1.6无菌广口瓶:500mLo
6.
1.7无菌吸管1mL(具
0.01mL刻度)、10mL(具
0.1mL刻度)
6.
1.8无菌平皿直径90mmo
6.
1.9无菌试管10mmX75mmo
6.
1.10无菌灭菌桶
6.2培养基和试剂
6.
2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基见附录A中A.
26.
2.2孟加拉红培养基见附录A中A.
36.3操作步骤
6.
3.1样品的稀释固体和半固体样品称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸储水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液或放入盛有225mL无菌蒸储水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1:制的样品匀液
6.
3.
1.2液体样品以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸储水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液
6.
3.
1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液按
6.
3.
1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管根据对样品污染状况的估计,选择2个3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),〜在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照
6.
3.
1.6及时将15mL20mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可〜放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀
6.
3.2培养待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃培养5d,观察并记录
6.
3.3菌落计数肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数以菌落形成单位(colonyforming units,CFU)表示选取菌落数在10CFU150CFU的平板,根据菌落形态〜分别计数霉菌和酵母数霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计菌落数应采用两个平板的平均数
6.4结果与报告若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算
6.
4.
1.2若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算
6.
4.
1.3若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算;如为原液,则以小于1计数
6.
4.2报告
6.
4.
2.1菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告
7.
4.
2.2菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数来表示结果;也可用10的指数形式来表示,此时也按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告,报告或分别报告霉菌和/或酵母数
8.0相关文件无
9.0质量记录表单
8.1KJWIF-QA-35《原辅料及食品接触面微生物检验报告》附录A(规范性附录)培养基和试剂A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂A.
1.1成分马铃薯(去皮切块)300g葡萄糖
20.0g琼脂
20.0g氯霉素
0.1g蒸储水1000mLA.
1.2制法将马铃薯去皮切块,加1000mL蒸储水,煮沸10min20min用纱布过滤,补加蒸储水至1000〜mLo加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装后,121C灭菌20min倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中A.2孟加拉红培养基A.
2.1成分蛋白陈
5.0g葡萄糖
10.0g磷酸二氢钾
1.o g硫酸镁(无水)
0.5g琼脂
20.0g孟加拉红
0.033g氯霉素
0.1g蒸储水1000mLA.
2.2制法上述各成分加入蒸储水中,加热溶化,补足蒸镭水至1000mL,分装后,121℃灭菌20min倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中附录B(资料性附录)霉菌直接镜检计数法常用的为郝氏霉菌计测法,本方法适用于番茄酱罐头B.1设备和材料B.
1.1折光仪
8.
1.3郝氏计测玻片具有标准计测室的特制玻片
8.
1.4盖玻片
8.
1.5测微器具标准刻度的玻片B.2操作步骤B.
2.1检样的制备取定量检样,加蒸储水稀释至折光指数为
1.
34471.3460(即浓度为〜
7.9%~
8.8%),备用
8.
2.2显微镜标准视野的校正将显微镜按放大率90125倍调节标准视野,使其直径为〜
1.382mmB.
2.3涂片洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察B.
2.4观测将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察50个视野,同一检样应由两人进行观察B.
2.5结果与计算在标准视野下,发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野(
1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(-),按100个视野计,其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数附录C霉菌和酵母计数的检验程序。