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文本内容:
酶的特性实验酶的特性实验
一、目的酶是生物催化剂,生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响,对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义
二、实验原理酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异(专一)性,即一种酶只能对一种底物或一类底物(此类底物在结构上通常具有相同的化学键)起催化作用,对其他底物无催化反应例如,淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖昔键的水解,但是淀粉酶只对淀粉起作用,蔗糖酶只水解蔗糖还原糖产物可用班乃德试剂鉴定通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异,说明这些环境因素与酶活性的关系唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下淀粉蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖与碘反应蓝色蓝紫色红色无色无色PH
8.0磷酸缓冲液ml0031%淀粉溶液ml111稀释唾液ml111结果颜色摇匀,置37水浴中继续反应2分钟,每隔1分钟从第2号管中取出1滴反应液于比色板上,加碘液检查反应进行情况,直至反应液不再变色,即可停止反应,取出所有试管,并向个试管内加入2滴碘液,充分混匀,检查并记录各管颜色,解释PH对酶活性的影响四X激活剂和抑制剂对酶活性的影响取3支试管,按下表操作操作项目管号1231%CuS04ml101%NaCIml10蒸储水ml001稀释唾液ml
1110.1%淀粉溶液ml2结果颜色摇匀,置37℃水浴反应lmin左右即可用碘液检查2号试管淀粉水解程度,待2号试管的反应液不再变色时取出所有试管,并向各管内加入碘液1-2滴,观察并记录各管颜色,解释结果
五、注意事项1各人唾液中淀粉酶活力不同,因此实验
2、
3、4应随时检查反应进行情况如反应进行得太快,应适当稀释唾液;反之,则应减少唾液淀粉酶稀释倍数2酶的抑制与激活最好用经透析的唾液,因为唾液中含有少量Cl-另外,注意O不要在检查反应程度时使各管溶液混杂
三、试剂和器材-X试剂
1、2%蔗糖溶液用分析纯蔗糖新鲜配制
2、
0.5%淀粉溶液二X材料1唾液淀粉酶溶液先用蒸储水漱口,再含10ml左右蒸僧水,轻轻漱动,2分钟后吐出收集在烧杯中,纱布过滤,即得清澈的唾液淀粉酶原液,根据酶活高低稀释50倍,即为唾液淀粉酶溶液2蔗糖酶溶液取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中,取蒸储水12ml,分次加入,边加边研磨约10钟,用漏斗加滤纸过滤,滤液加2倍蒸储水稀释三X仪器恒温水浴37℃X沸水浴10CTC\冰浴0℃X试管、吸管、2ml、5ml、量筒、比色板、胶头滴管等
四、操作方法-X酶催化的专一性取6支干净试管,按下表操作操作项目管号
1234560.5%淀粉ml1102%蔗糖ml001101稀释唾液ml100蔗糖酶溶液ml010100蒸储水ml011酶促水解摇匀,37水浴中保温10-15min班乃德试剂ml2222反应摇匀,沸水浴中加热5〜lOmin结果(颜色)(二X温度对酶活力的影响取3支试管,按下表操作操作项目管号
1230.5%淀粉溶液(ml)2稀释唾液ml111温度预处理5min℃037沸水浴结果摇匀,保持各自温度继续反应,5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于比色板上,用碘液检查反应进行情况,直至反应液不再变色只有碘液的颜色,立即取出所有试管,流水冷却2min,向各管加入碘液2滴,混匀观察并记录各管反应现象,解释之
三、pH对酶活力的影响管号123PH
5.0磷酸缓冲液ml300pH
6.8磷酸缓冲液ml0。