东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的产酶情况及联合药敏试验

东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的产酶情况及联合药敏试验铜绿假单胞菌（pa）是临床上常见的细菌之一随着氨基丙烯酸酯等碳青霉素的广泛应用,细菌产生了一种含有糊精素的碳青霉素酶，包括丝氨酸酶和金属酶，这给抗感染治疗带来了很大困难材料和方法地区

二、三级临床感染标本收集2018年1月至2021年6月东莞地区

二、三级共10家综合性医院在临床感染标本中分离的耐碳青霉烯类的PA216株，菌株为患者的第一株菌株，剔除重复株菌株、仪器与标准品血平板、麦康凯平板、M-H平板、Ox平d药敏纸片（江门凯林有限公司）,Vitek2-Compact全自动微生物鉴定仪、鉴定及药敏卡（法国生物梅里埃公司），亚胺培南缓冲液（上海科原实业发展有限公司），联合药物成品药敏板（温州康泰公司），抗菌药物标准品（北京中检所）C钢绞线C钢大肠埃希菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853（广东省临床检验中心）肺炎克雷伯菌ATCCBAA1705产酶阳性株和肺炎克雷伯菌ATCC BAA1706产酶阴性株（温州康泰公司）菌株鉴定及药敏试验用Vitek2-Compact全自动微生物鉴定仪和GN鉴定卡、GN09药敏卡进行菌株鉴定及药敏试验，按2020年CLSI规定标准进行采用2017年CLSI推荐的eCIM试验检测CRPA是否产碳青霉烯酶edta与3-氨基苯酸钠溶液采用纸片扩散法，制备

0.5麦氏单位菌悬液，涂布于M-H琼脂平板上，张贴4张亚胺培南（每片10Ug）药敏纸片，纸片中心距离225mni,在其中三张纸片上分别滴加10u LEDTA溶液、10uL3-氨基苯硼酸溶液、10uL EDTA溶液+10u L3-氨基苯硼酸溶液，35℃培养过夜后判读结果若含EDTA溶液抑制剂的亚胺培南抑菌圈直径与单药相差25inni以上,该菌株产生金属B-内酰胺酶，若含3-氨基苯硼酸抑制剂的亚胺培南抑菌圈直径与单药相差25nlm以上，该菌株产丝氨酸酶抗菌药物的联合药敏试验单个抗菌药物的最低抑菌浓度MIC检测采用微量肉汤稀释法分别对头抱他咤、哌拉西林/他噪巴坦、头抱哌酮/舒巴坦、美罗培南、阿米卡星、左氧氟沙星进行单个药敏MIC值检测按各药物折点需求，进行对倍浓度稀释，加入到微量孔中制备

0.5麦氏的菌液，加入到药敏试验培养基，菌液和培养基的比例为1:100,每孔接种到含有不同药物浓度梯度的微IOOHL量孔中，经35℃1620h培养，以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度MIC,〜质控菌株为ATCC27853联合药敏试验采用微量棋盘释释法，对头抱他咤、美罗培南、哌拉西林/他嗖巴坦+头抱哌酮/舒巴坦4个单药分别与阿米卡星、左氧氟沙星进行8个组合，检测对CRPA体外联合的抗菌效应根据单药测定的MIC值，选取2倍MIC为最高浓度，依次对倍稀释8个稀释度，分别选取所需两种药物以1:1的比例各50li加入96孔平板的横轴和纵t轴混匀，再用移液器取100Hl菌液接种到微量孔中，35℃培养16~20h,按2020年CLSI的判定标准读取MIC结果部分抑菌Fractional inhibitoryconcentration,FIC指数的计算与判读标准FIC为联合用药时各药的MIC值分别除以单药时MIC值商的和，即FIC指数=MIC A药联用/MICA药单用+MIC B药联用/MIC B药单用抗菌药物的联合效应FIC指数W

0.5为协同；

0.5VFICW1为相加作用；1FIC^

2.0为无关作用，FIO

2.0为拮抗作用采用SPSS

17.0软件进行数据统计分析结果216株CRPA碳青霉烯酶表型检测结果中产碳青霉烯酶的构成比为

38.4%,不产酶的构成比为

61.6%,具体情况见表1pa和crpa对imp的耐药情况2018—2020年东莞地区CRPA检出率为

12.9%

14.6%,PA对亚胺培南IMP和美罗培南MEM〜耐药率分别为

9.0%H.3%和

7.1%~

9.1%,CRPA对IMP和MEM耐药率分别为

93.4%

97.8%〜〜和

71.2%

71.8%,具体情况见表2〜阿米卡星/mic抗菌药物头胞他咤CAZ、头泡哌酮/舒巴坦CSL、哌拉西林/他理巴坦TZP、美罗培南MEM单药和左氧氟沙星LEV及阿米卡星AMK联合应用时的MIC不同协同能力描述联合药物FIC指数的构成比闾结果中，以协同或相加作用构成比为主，协同最高构成比为CAZ+LEV

67.1%,相加最高构成比为CSL+AMK

46.8%,无关作用构成比为

8.3%

39.8%,拮抗〜作用构成比相对较低为

1.4%

5.6%,具体情况见表4o〜讨论近年来PA对碳青霉烯类抗生素耐药率不断上升据报道各类产丝氨酸酶、金属酶和不产碳青霉烯酶的产酶在216株CRPA碳青霉烯酶表型检测结果中，产碳青霉烯酶共83株，占

38.4%83/216,其中单一产丝氨酸酶为

17.6%38/216,单一产金属酶为

13.9%30/216,同时产丝氨酸酶+金属酶为

6.9%15/216,不产碳青霉烯酶为

61.6%133/216本研究中产碳青霉烯酶只是PA对碳青霉烯类耐药的机制之一，不是对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制，与刘涛等报道相似近3年pa对亚胺培南耐药率近3年东莞地区CRPA检出率分别是

13.5%、

14.6%

12.9%,检出率在15%以下，总体变化不大2019年CARSS监测数据显示近3年东莞地区PA对亚胺培南耐药率为

9.0%~

9.7%,美罗培南的耐药率为

7.1%~

9.1%,CRPA对美罗培南耐药率为

71.2%

71.8%,亚胺培南耐药率

93.4%

97.8%CARSS监测网报告中的〜〜2014—2019年PA对亚胺培南耐药率为

18.2%〜

21.0%,美罗培南的耐药率为15・1%~

18.5%胡付品等报道本研究药物联合前后的MICcrpa的感染治疗PAE感染，目前临床主要采用以碳青霉烯类，多黏菌素，抗PA选择B-内酰胺类药物为基础的联合治疗方案，或采用双B-内酰胺类联合阿奇霉素或联合环丙沙星雾化吸入和局部用药等方案治疗CRPA的感染。