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奇异变形杆菌产超广产金属-内酰胺酶检测及其耐药性分析奇变形杆菌是一种革兰氏阴性条件的病毒它是肠球菌(肠球菌也是如此)感染的主要病毒也可能导致革兰氏病、结膜感染、伤口、呼吸道感染、烧伤、其他部位的感染材料和方法1细菌培养和鉴定
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1.1受试菌株从义乌市第二人民医院2010年1月至2013年12月门诊、住院患者痰液、血液、导管、尿、分泌物等送检标本中分离出的奇异变形杆菌302株菌株作为受试菌,排除同一患者重复菌株细菌的分离培养按照《全国临床检验操作规程》(3版)进行,细菌均经VITEK-2Compact自动细菌鉴定仪统一进行鉴定L
1.2抗菌药物纸片亚胺培南(IPM)>美罗培南(MEM)、头抱哌酮/舒巴坦(SPS)为英国Oxiod产品,氨曲南(ATM)>氨芳西林/舒巴坦(AMS)>哌拉西林/他哇巴坦(TZP)、头抱他咤(CAZ)、头抱口塞月亏(CTX)、头孑包曲松(CRO)、头抱此月亏(FEP)、头抱西丁(FOX)、阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、吠喃妥因(NIT)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV),多粘菌素B(PB)、复方新诺明(TSU)、克拉维酸、邻氯西林及EDTA-Na菌株鉴定及药敏试验
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2.1各类B-内酰胺酶活性检测采用冻融裂解法制备粗提酶液,应用改良三维试验法检测AmpC、ESBLs和MBLs三类B-内酰胺酶活性,按文献[3]进行以大肠埃希菌DH5a2919为AmpC阳性对照,以肺炎克雷伯杆菌ATCC700603为ESBLs阳性对照
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2.2Hodge试验挑取大肠埃希菌ATCC25922菌落数个,制成相当
0.5号麦氏管(McFarland)浓度菌液,棉拭子浸透,挤去多余液体,均匀涂布在MH平板上,中间贴10ug/片厄他培南纸片,将实验菌株以厄他培南纸片为起点,用无菌接种环自纸片外缘向平板边缘以离心方向划线,35℃培养1617h后观察结果,厄他培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为阳性阳性〜表明产KPCL
2.3药敏试验奇异变形杆菌分离菌株采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法测定菌株对18种抗菌药物的抑菌环直径标准菌株铜绿假单胞菌ATCC25873进行质控,按美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定判断结果
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2.4统计学处理耐药率差异采用四格表x检出情况21s
2.1奇异变形杆菌分离株各种B-内酰胺酶及KPC检出率302株奇异变形杆菌分离菌株单产ESBLs60株,检出率为
19.87%;单产AmpC40株,检出率为
13.25%;单产KPC3株,检出率为
0.99%;所有菌株中未检出MBLs;同产ESBLs及AmpC36株,检出率为
11.92%;未发现其他双产酶菌株,未发现同产ESBLs、AmpC及KPC三种酶菌株抗菌活性的变化3变形杆菌为肠道的正常菌群,广泛存在于泥土、水和被粪便污染的物质中,并可在一定条件下引起各种感染,是导致医源性感染的重要条件致病菌随着抗生素的不断研发和大量应用,新的耐药菌株不断产生,细菌的耐药性问题也日益成为关注的焦点B-内酰胺类抗生素,尤其是第三代头抱菌素,因其抗菌作用强、抗菌谱广、毒性低等特点,是治疗革兰阴性菌感染的最重要的抗菌药物,但这些新B-内酰胺类抗生素在临床上广泛应用后耐药菌株随之不断增加,耐药机制的研究备受关注我们研究发现,奇异变形杆菌分离株单产ESBLs、AmpC及同产ESBLs及AmpC检出率分别为
19.87%、
13.25%和
11.92%;所有菌株中未检出其他类型产酶菌株提示,该菌产生ESBLs、AmpC等B-内酰胺酶但其不产生MBLs与文献奇异变形杆菌分离株的耐药率结果显示,对亚胺培南、美罗培南、多粘菌素B的耐药率在
2.65%
10.26%;对氨曲南、头抱哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唾巴坦、头抱他咤、头抱西丁、头抱〜毗月亏和阿米卡星耐药率在
29.80%
43.05%;其余抗生素的耐药率均高于
50.00%非产酶〜分离株对常用抗生素(吠喃妥因、复方新诺明除外)的耐药率均低于
50.00%;其中单产ESBLs株对头抱西丁的耐药率为
43.33%,单产AmpC株对头抱毗月亏的耐药率为
25.00%;产酶分离株对亚胺培南、美罗培南的耐药率较低,对其余常用抗生素的耐药率较高,提示亚胺培南、美罗培南对ESBLs和AmpC株有良好的抗菌活性,这可能与碳青霉烯类抗生素对极大多数由质粒或染色体介导的B-内酰胺酶都有较高的稳定性,与青霉素结合蛋白亲和力强,导致细菌生长繁殖和延伸受抑制,并溶解死亡;能有效渗透细菌外膜进入周质间隙,并且存在抗生素后效应有关;上述药物可作为相应敏感菌的抗感染治疗的首选药物产ESBLs、AmpC及KPC菌株与非产酶菌株相比,对亚胺培南、美罗培南的耐药率差异无统计学意义(P
0.05),对其余大部分抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(PV
0.01),产酶菌株呈多重耐药,给临床抗感染治疗带来很大的困难推测产酶菌株引起多重耐药的原因
(1)产ESBLs的奇异变形杆菌在携带编码ESBLs耐药基因的质粒的同时,也带有其他作用机制的抗菌药物如氨基糖昔类、喳诺酮类、磺胺类等药物的耐药基因,且导致DNA旋转酶的gyrA基因发生点突变,从而对氨基糖甘类、喳诺酮类、磺胺类药物呈现为多重耐药;
(2)奇异变形杆菌产生的AmpC酶,属于质粒AmpC酶,常携带大质粒,同时编码对其他类抗生素的耐药性,表现对一代至三代头狗菌素、头霉素、氨基糖甘类及抗假单胞菌青霉素(几乎所有的抗生素)均耐药我们在研究中还发现,3株KPC阳性株仅对多粘菌素B敏感,对其余抗生素均表现为高度耐药性,给临床抗感染治疗带来极大的挑战有学者研究认为总之,临床微生物实验室在做好奇异变形杆菌分离、培养和鉴定的同时,加强对奇异变形杆菌的耐药性及ESBLs、AmpC及KPC的监测;临床医师依据实验室药敏结果,采取合理有效的用药措施,显得十分重要
2.2奇异变形杆菌分离株的耐药率检测302株奇异变形杆菌对18种临床常用抗菌药物呈现不同程度的耐药,其单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs+AmpC菌株对18种抗生素的耐药率及比较,见表1(注由于单产KPC菌株株数过少,未予以入表统计)。