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依据国家安全标准GB/T15670-1995,以初成年大鼠和家兔为材料,测试了生防菌Ht-q6可湿性粉剂急性经口毒性、急性经皮毒性及急性皮肤刺激,检测机构山西农业大学动物科学院
1.7病害调查及分级标准试验地选择为山西晋中太谷县水秀乡里修村农户的番茄大棚,番茄品种为鑫农1号,定植于2016年12月16日试验采用田间随机区组设计,每小区面积为10m番茄灰霉病果的分级标准,0级:无病斑;1级:残留花瓣发病或柱头发病;3级:萼片腐烂或柱头发病蔓延至果脐部;5级:果脐部有浸润斑无霉层;7级果脐部有浸润斑有霉层但未扩张到其他部位;9级:果脐部有浸润斑有霉层并已扩张到其他部位番茄叶霉病病叶的分级标准,0级:无病斑;1级:病斑面积占整个叶面积的5%以下;3级:病斑面积占整个叶面积的6%10%;5级:病斑面积占整个叶面积的11%~20%;7级:病斑面积占整个叶面〜积的21%50%;9级:病斑面积占整个叶面积的51%以上〜病情指数二》(各级病叶/果数义该病级值)/(调查总叶/果数X最高病级值)XIOOo防治效果(吩=(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数X1002结果与分析
2.1菌体与芽胞总含量的测定发酵培养液以75m L/250m L装瓶,接种量K,置于摇床上,30℃180r/min速度振荡48h,菌体与芽胞总含量达到最大,为
3.57X
102.2生防菌ht-q6湿性粉的载体和添加剂的筛选结果
2.
2.1润湿时间对芽胞存活率的影响测试的6种载体,白炭黑和硅藻土的悬浮率较好而且差异不显著,分别为
53.4%和
52.7%硅藻土和高岭土的润湿时间分别为72和75s,14d后芽胞存活率差异不显著,白炭黑的吸附能力最大,其次为硅藻土(表1)因硅藻土与其他载体相比在悬浮率和润湿时间上与其他处理差异显著,所以选择硅藻土为最佳载体
2.
2.2分散剂的筛选在母粉中加入润湿剂后,十二烷基苯磺酸钠的悬浮率、润湿时间和芽胞存活率分别为
65.6%28$和
89.5%,与其他处理相比差异显著(表2)加入分散剂后,悬浮率相对于母粉对照来说都有提高,其中木质素磺酸钠的悬浮率与润湿时间与其他处理相比差异显著,对芽胞存活率基本无影响(表3)综合考虑选择十二烷基苯磺酸钠为最佳润湿剂,木质素磺酸钠为最佳分散剂
2.
2.3二烷基苯磺酸钠和木质素磺酸钠最佳配比的确定润湿剂利分散剂的不同配比对可湿性粉剂的悬浮率和润湿时间都有一定影响,随着十二烷基苯磺酸钠浓度的增加,悬浮率逐渐升高;随着分散剂木质素磺酸钠浓度的降低,润湿时间逐渐提高,在5:5时悬浮率和润湿时间分别为
76.9%和41s,综合考虑确定十二烷基苯磺酸钠和木质素磺酸钠的最佳配比为5:5o助剂用量为润湿剂和分散剂共占制剂的百分含量随助剂含量的增加悬浮率也在逐渐增加,润湿时间不断延长,在12%时悬浮率和润湿时间分别为79%和40s,在14%时悬浮率和润湿时间分别为
79.2%和44s,虽然悬浮率有小幅度的提高但是润湿时间有大幅度的延长,综合考虑,确定12%为最佳助剂用量(表4)o
2.
2.4生防菌ht-q6湿性粉剂的制备KH
2.
2.5不同保护剂的润湿时间由表6可知,抗坏血酸和竣甲基纤维素的悬浮率最高,分别为
76.2%和
72.5%,与其他保护剂相比差异显著,两者的润湿时间分别为37和41so但紫外保护剂主要考虑对芽胞的保护效果,且添加抗坏血酸后芽胞含量在24h内变化不大所以综合考虑,确定最佳紫外保护剂为抗坏血酸
2.3生防菌ht-q6湿性粉的质量分析生防菌Ht-q6可湿性粉剂的芽胞含量为
2.28X
102.4继续培养番茄植株后,其生长情况测定生防菌Ht-q6可湿性粉剂对番茄植株的安全性测定结果表明,番茄叶片和茎干的接种针穿刺接种(图2A)培养3d后,和对照组(图2B)比较无明显差异,番茄植株经可湿性粉剂100义稀释液浸根处理,移栽后正常生长,无发病状况(图2C)与对照组(图2D)无明显差异
2.5急性经皮毒性试验急性经□毒性试验结果表明,对大鼠予经口灌胃之后,没有出现死亡和明显的中毒症状存活动物体重3d恢复或增重试验结束后处死试验大鼠,据检无异常情况Ht-q6可湿性粉剂对雌、雄大鼠急性经DLD急性经皮毒性试验结果表明,给大鼠涂抹试剂之后,没有出现死亡和明显的中毒症状存活动物体重3d恢复或增重试验结束后处死试验大鼠,据检无异常情况Ht-q6可湿性粉剂对雌、雄大鼠急性经皮LD急性皮肤刺激试验结果表明在试验周期内,试验兔的皮肤涂抹部位未出现红斑、水肿,积分均值为0,按国家“皮肤刺激强度分级”标准评定,可湿性粉剂对试验兔的皮肤没有刺激性
2.6对照药剂百菌清疗效由表8可知,在利用生防菌Ht-q6可湿性粉剂对番茄叶霉病和灰霉病的防治中,稀释200义的防效最好,分别为
74.3%和
77.1%,与各自对照药剂百菌清
72.4%和
69.9%的防效相比,叶霉病防治效果差异不显著而灰霉病防治效果差异显著为了减少化学药剂的使用,建议在生产实践中使用稀释倍数为200X的可湿性粉剂来预防和控制叶霉病与灰霉病的发生3可湿性粉剂的制备方法通过对载体、湿润剂、分散剂、稳定剂和紫外保护剂的筛选,本文确定了生防菌Ht-q6可湿性粉剂的最佳配方质量检测结果符合国家标准值,质量合格本文在解淀粉芽胞杆菌菌剂的剂型上选择了生物农药中主流剂型可湿性粉剂,相比于液体制剂更易运输和贮存,与其他固体制剂如粉剂和颗粒剂相比,颗粒直径、湿润性、有效成分等多方面都有提高,防治病害范围更广可湿性粉剂中载体所占比例最大,对制剂的影响也最大,所以筛选最佳载体是研制可湿性粉剂中最为关键的一步王剑等安全性测试对番茄植株安全,田间试验结果也表明,稀释倍数为200X的可湿性粉剂对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果最佳大田药效试验结果受环境因素影响也较大,尤其大棚内温湿度,所以在试验时悬挂温湿度计,严格监测控制大棚内温度和湿度,减少外界因素的干扰总体该菌剂的研制成功及良好的防治效果,在一定程度上可减少部分化学农药的使用,具有社会和生态利用价值。