大鼠肿瘤发生的免疫组化及sabc法的建立

大鼠肿瘤发生的免疫组化及sabc法的建立肿瘤的形成是由于身体的自静态破坏和细胞异常增生，以及避免免疫监测的结果通过FasApo-1受体和Fas配体FasL介导的细胞凋亡,被认为是机体保持自稳态的重要机制之一1材料和方法

1.1faol和苯巴比妥pb,pas,pas二乙基亚硝胺DEN、二乙酰基氨基笏2-AAF Sigma公司产品，苯巴比妥PB,北京试剂公司，Fas,FasL抗体Santo Cruz公司产品；免疫组化SABC试剂盒武汉博士德公司产品

2.2-af-pb的饲料及给药方案健康雄性Wistar大鼠272只，体质量150200g,分为6组于实验第1天一次性腹腔注射〜二乙基亚硝胺DEN生理盐水溶液200mg/kg,分笼饲养，基础饲料，自由饮水于第3周开始,在基础饲料中加入

0.02%2-AAF,饲养1周后，在1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉下行70%切肝手术切除肝左叶和中叶o继续喂含

0.02%2-AAF饲料,第6周开始,给予掺入PB的饲料高、中、低三个剂量组分别给予含有500mg/kg,100mg/kg,10mg/kg PB的饲料,启动组在相同时间喂饲基础饲料;单纯促癌组喂饲500mg/kg PB饲料;每组按照加入促癌物PB后

1、

5、

10、

15、

20、30周分为6个时相点

①高剂量组500mg/kg PB48只；

②中剂量组100mg/kg PB48只;

③低剂量组10mg/kg PB48只；

④启动对照组只启动，不加促癌PB48只；

⑤促癌对照组不启动，给予500mg/kg PB40只，

⑥正常对照组不给任何处理因素，自由饮食,基础饲料40只

3.3组织切片的制备动物在1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉下开腹,从门静脉插管，灌注预冷的4%多聚甲醛PBS固定液含KDEPC至肝脏成黄白色，取肝脏组织切成1cmXl cmX

0.2cm组织块，在4%多聚甲醛PBS中继续固定612h,常规石蜡包埋，切片备用〜

4.4fas阳性表达采用SABC法,具体方法参照博士德公司SABC试剂盒说明书进行Fas阳性表达主要定位于肝细胞膜上,少数可见胞浆着色;FasL阳性表达主要定位于胞浆中，膜上也可见表达根据染色强度分为强阳性+++,中等阳性++,弱阳性+,未见表达Bo2结果

5.1fas表达免疫组化结果显示在正常大鼠肝组织Fas蛋白呈弱阳性表达高、中、低剂量组和启动组Fas表达强阳性高剂量组和中剂量组在给予促癌物PB115周,Fas仍呈强阳性表达，阳性表〜达主要定位于肝细胞膜上,少数可见胞浆着色,部分肝窦壁和小血管管壁也呈阳性表达;在PB处理15周后,Fas表达明显呈下降趋势促癌组和正常组Fas表达未见明显改变，见表

12.2faol蛋白表达免疫组化结果显示正常组和促癌组未见FasL蛋白表达,其余各组可见FasL蛋白表达高、中剂量组在加促癌物后15周FasL蛋白表达明显增多，阳性表达主要在胞浆中，膜上也可见表达在肝小叶外周带，靠近汇管区亦可见阳性表达低剂量组和启动组FasL表达未见明显改变，见表23起着重要的作用Fas/FasL在肝脏的自身稳定中起着重要的作用有报道表明肝细胞明显对Fas-介导的死亡易感,Fas/FasL可以调节清除不需要的衰老肝细胞。