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多重耐药鲍曼不动杆菌-内酰胺类耐药基因检测本生半革兰氏阳性杆菌(ab)是一种非发酵的革兰氏阴性杆菌,广泛分布于人体和医院环境中AB作为机会致病菌,可在机体免疫力下降或功能受损时引发严重感染,如败血症、呼吸相关性肺炎(VAP)、脑膜炎、泌尿系统感染等,尤其以重症监护病房(ICU)、神经外科等病房多见,是医院感染的重要病原体之一近年来,随着广谱抗菌药物的大量使用,AB对临床常用抗菌药物的耐药性也越来越高中国细菌耐药监测网(CHINET)监测资料显示,2007—2010年AB对亚胺培南的耐药率依次为
39.4%、
48.1%、
54.8%、
57.1%,对美罗培南的耐药率依次为:
44.5%、
49.3%、
57.2%、
58.3猊对头抱哌酮/舒巴坦的耐药率依次为
5.8%、
14.6%、
26.3%
30.7%2007年AB多重耐药(MDR)率为
47.7猊泛耐药(PDR)率为
2.8%,2008年泛耐药率为
10.9%(333/3058),2009年MDRAB和PDRAB检出率分别为
44.4%和
17.0%,2010年泛耐药株数比2009年显著增多1菌株鉴定及药敏试验
1.1菌株来源及鉴定收集2010年8月一2011年7月我院临床分离的非同一患者的MDRAB22株应用法国公司API20NE试验条(生物梅里埃公司,法国)和WalkAway-40微生物鉴定/药敏测试系统(西门子公司,德国)进行细菌鉴定同时用大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853作为室内质控的标准菌株
1.2药敏试验药敏试验为肉汤稀释法采用西门子公司的WalkAway-40微生物鉴定/药敏测试系统测定AB对11种抗菌药物的敏感性,分别为头抱他咤、头抱睡月亏、头抱此月亏、头抱哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星和复方磺胺甲口恶喋结果判读根据美国临床实验室标准化协会(CLSD2011年版标准进行采用WHONET
5.4进行数据分析
1.3PCR扩增模板制备将分离的AB接种于LB液体培养基(碧云天,中国)中培养24h,取
1.5mL培养过夜的菌液,13000r/min离心30s,使用树脂型TM基因组DNA提纯试剂盒(赛百盛,中国)提取细菌DNA,-20c冰箱保存备用
1.4PCR耐药基因检测各种目的基因(TEM、SHV、CTX-M、PER、DHA、IMP、VIM、SIM、OXA-
23、OXA-
24、OXA-58)的引物序列
1.5PER基因亚型的确定使用双脱氧末端终止法检测PER耐药基因序列并分型2耐药基因检测结果
2.1药敏试验22株MDRAB对头抱他陡、头抱睡月亏、头抱毗月亏、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星和复方磺胺甲口恶唾耐药率均为
100.00%对亚胺培南、美罗培南、头抱哌酮/舒巴坦的耐药率分别为
50.00%、
40.91%、
31.82%,中介率分别为
31.82%、
36.36%、
31.82%
02.2耐药基因PCR检测结果22株(
100.00%)AB携带耐药基因0XA-23群,16株(
72.73%)携带TEM,12株(
54.55%)携带IMP,4株(
18.18%)携带PERSHV、CTX-M、DHA、VIM、SIM、0XA-24群、OXA-58群基因检测均为阴性部分电泳图见图广
32.3PER耐药基因亚型使用双脱氧末端终止法证实4株PER基因为PER-1型基因见图
43.abab携带tem基因检测本研究显示MDRAB对头施哌酮/舒巴坦耐药率最低,其敏感性高于碳青霉烯类抗生素,因此,前者仍不失为治疗MDRAB感染的有效药物之一超广谱B-内酰胺酶(ESBLs)基因主要包含TEM、SHV、CTX-M、PER等,其中TEM基因是检出次数最多的基因型国内外报道的AB携带TEM型基因已超过100多种IMP型金属酶1999年在意大利首次发现于铜绿假单胞菌中,随后国外各地报道了产IMP型金属酶ABAB携带的D类碳青霉烯酶根据同源性的不同可分为4个亚群,分别为:OXA-23群(OXA-
23、0XA-
27、OXA-49)、0XA-24群(OXA-24/
40、OXA-
25、OXA-
26、OXA-72)、OXA-58群(OXA
58、OXA-96).OXA-51群碳青霉烯酶基因主要位于染色体上,OXA-51群基因可存在于AB所有的染色体上,因此0XA-51群遗传物质是AB重要的基因遗传标志。