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偶氮染料偶氮的合成及测定亚硝酸盐是一种具有强烈毒性的致癌癌它可以与胺钠一起产生亚硝酸盐,这将对人体产生危险最严重的是高铁血红蛋白症、组织缺氧、血管扩张和血压降低蔬菜中亚硝酸盐的测定是食品卫生检验的必测项目之一本文基于在弱酸性介质中,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应,生成的重氮化合物,再与盐酸蔡乙二胺偶联成紫红色的偶氮染料的原理用分光光度法在波长550nm处测定试样中亚硝酸盐含量1实验部分
1.1仪器和试剂722型分光光度计;小型绞肉机等硼砂、亚铁氟化钾、乙酸锌、对氨基苯磺酸、盐酸蔡乙二氨、盐酸、Na NO
1.2试剂的制备
1.
2.
12.1亚铁氧化钾水溶液称取
106.0g亚铁氟化钾,用水溶解,并稀释至1000m Lo
1.
2.2醋酸锌溶液称取
220.0g乙酸锌,加30m L冰乙酸溶于水,并稀释至1000m L
1.
2.3饱和硼酸溶液称取
5.0g硼酸钠,溶于100m L热水中,冷却后备用
1.
2.4氨基苯磺酸溶液4g-l称取
0.4g对氨基苯磺酸,溶于100m L20%盐酸中,置棕色瓶中,混匀,避光保存
1.
2.5盐酸菜二胺水溶液2g/l称取
0.2g盐酸蔡乙二胺,溶解于100m L水中,混匀后,置棕色瓶中,避光保存
1.
2.6亚硝酸钠标准溶液准确称取
0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解,移入500m L容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀此溶液为每毫升相当于200Hg的亚硝酸钠
1.
2.7亚硝酸钠标准使用溶液临用前,吸取亚硝酸钠标准溶液
5.00m L,置于200mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液为每毫升相当于
5.Ong的亚硝酸钠
1.4亚铁氧化钾亚铁氧化钾液的制备称取约
5.0g经绞碎混匀的试样,置于50mL烧杯中,加
12.5m L硼酸钠饱和溶液,搅拌均匀,以70℃左右的水将试样洗入250m L容量瓶中,于沸水浴中加热15n in,取出后冷l至室温,然后一边转动,一边加入5m L亚铁氟化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质加水至刻度,摇匀,放置
0.5h,除去上层脂肪,清液用滤纸过滤,弃去初滤液20mL,滤液备用
1.5测量
1.
6.1标准曲线的绘制准确移取Na NO线性方程:AR.0132x,r标准曲线的绘制准确移取经过处理的试样滤液10m L于25m L带塞比色管中,分别加入
4.5m L氯化镂缓冲液,加
2.5m L60%醋酸后立即加入
5.0m L显色剂,加水至刻度,混匀,在暗处静置25min,用1cm比色皿,以试剂为参比,于波长550nm处测吸光度,从标准曲线上查出相应的Na NO2结果和讨论(表1)3偶氮染料法实验结果表明,腌制蔬菜中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在弱酸性溶液中反应生成重氮化合物,重氮化合物再与盐酸蔡乙二胺偶联成紫红色的偶氮染料,在Na NO经计算所测的几种常见腌制蔬菜中亚硝酸盐含量均符合国家部分食品中亚硝酸盐的限量卫生标准。