hifa1表达与肿瘤分级、复发的关系

hifal表达与肿瘤分级、复发的关系膀胱肿瘤是尿液中最常见的肿瘤，其特点是发病率高、复发率高、恶性程度低虽然初发时,80%的肿瘤系恶性程度较低的乳头状瘤，但多次复发不但给病人造成巨大的身心痛苦和经济负担,而且每次复发肿瘤恶性程度升高,最终危及病人生命由于肿瘤生物学行为的异质性，目前尚无特异指标预测其生物学特性来指导临床选择最佳治疗方案HIF-la是近年发现的一种在哺乳动物组织中广泛存在的转录因子,组织处于缺氧状态时它发挥转录和基因调控作用肿瘤组织生长迅速,必然会处于缺氧状态而诱导HIF-la表达已有研究表明HIF-la在肝癌、乳腺癌、脑肿瘤等多种肿瘤组织中表达并调节其生物学行为1材料和方法

1.1病例临床病理分级标本全部来自野战外科研究所和解放军44医院泌尿外科19962000年诊治的病例共计正〜常膀胱粘膜19例，膀胱移行细胞癌70例,病理分级其中I级21例，II级27例,HI级22例根据是否复发分组,初发组51例，复发组

191.2单克隆抗体的制备鼠抗人HIF-la单克隆抗体购自美国LABVISION公司，SP工作液试剂盒和DAB显色剂购自武汉博士德生物工程有限公司染色方法参照说明进行组织标本常规石蜡包埋，制成4um厚切片，常规脱蜡,30%新鲜双氧水灭活内源酶,将切片浸入

0.01M橘檬酸盐缓冲液pH

6.0,微波炉加热至沸后断电，间隔10分钟重复两次,冷却后

0.1MPBS洗涤,抗原修复液修复抗原,山羊血清封闭后不洗,滴加11000稀释的HIF-la单克隆抗体,4℃过夜,

0.1MPBS洗涤后加生物素标记羊抗鼠二抗,30℃染色20分钟后,

0.1MPBS洗涤,滴加试剂SABC,室温放置20分钟后,DAB显色，苏木素轻度复染，二甲苯透明，封片显微镜下观察并计数阳性染色细胞数光镜下观察,棕黄色染色为阳性,不着色为阴性400倍光镜下双盲法计数400个肿瘤细胞的阳性染色数,平均阳性染色细胞＞20%为阳性3血管检测方法

1.鼠抗人CD-34单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，SP工作液试剂盒和DAB显色剂购自武汉博士德生物工程有限公司染色方法同HIF-la表达的检测光镜下观察，以棕黄色染色为阳性,不着色为阴性低倍镜下先从每张切片选出三个血管丰富区,200倍显微镜下双盲法计数微血管以一个或聚集在一起的数个染为棕黄色的内皮细胞为一个血管计数,每人计数三个视野,取其均值作为新生血管计数管腔大于三个红细胞直径或管壁带有肌层的大血管不作为新生血管计数

1.4统计处理采用SPSS

10.0专用统计程序进行X2结果1hisf-aa表达情况

2.19例正常膀胱粘膜中均未见HIF-la表达;21例I级移行细胞癌HIF-la表达平均阳性率为29%;27例H级移行细胞癌HIF-la表达平均阳性率为41%;22例HI级移行细胞癌HIF-la表达平均阳性率为64%I、n级，n、in级之间统计学处理差别不显著，但I、in级之间统计处理差别显著P

0.05o51例初发肿瘤IIIF-la表达平均阳性率为35%;19例复发肿瘤HIF-la表达平均阳性率为74%二者相差显著PV

0.05相关统计分析HIF-la表达平均阳性率和肿瘤分级呈正相关关系厂

0.9837,P

0.01,利复发率呈正相关关系r=

0.9469,P

0.05o

2.2移行细胞癌新生血管计数结果19例正常膀胱粘膜中均未见新生血管,21例I级移行细胞癌新生血管平均数为

39.71+

11.62,27例II级移行细胞癌新生血管平均数为

44.70±

11.52,22例HI级移行细胞癌新生血管平均数为

52.36±

16.83I、II级，II、川级之间统计学处理差别不显著，但I、III级之间统计处理差别显著P

0.05o51例初发肿瘤新生血管平均数为

42.68±

13.73,19例复发肿瘤新生血管平均数为

53.47±

12.50二者相差显著P〈

0.05相关统计分析新生血管平均数和肿瘤分级呈正相关关系厂0,9837,P

0.01,和复发率呈正相关关系r=

0.9469,P

0.01o

2.3多元表达的紧密度对新生儿血管计数的影响在所有病例的HIF-la表达和新生血管计数进行相关分析，结果表明HIF-la表达和新生血管计数呈显著的正相关关系，新生血管计数随HIF-la表达的增高而增高二

0.

9983.P

0.05o3调节血管密度和肿瘤复结剂用量是抑制机制膀胱肿瘤在我国是泌尿外科最常见肿瘤,尽管外科技术的进步使膀胱肿瘤的治疗得到了很大的提高，但是，膀胱肿瘤的发病率、复发率、死亡率无明显下降初发时恶性程度较低的表浅乳头状瘤随时间的进展和复发,恶性程度不断升高,最终发生浸润、转移而危及病人生命多种因子、瘤标被认为可预测肿瘤的恶性程度，但是，目前还没有一个可指导临床选择最佳治疗方案的特异性高、敏感性强的指标为寻找可预测膀胱肿瘤生物学行为的特异、敏感指标,我们回顾性地分析、研究了HIFTa在膀胱肿瘤的表达及其和MVC、病理分级、复发的关系HIF-la是一种异源二聚体蛋白质复合物转录因子，由HIF-la和HIF-lszlig两个亚基组成,其中HIF-la是功能亚基,HIF-lszlig是结构亚基,二者可通过核转位由胞浆进入胞核，再通过二聚化作用形成稳定的异源二聚体并通过适形性变化后调节其靶基因目前已知识HIF-la的靶基因有40多种，其功能涉及血管生成、血管塑型vascular remodeling＞红细胞生成、糖转运、糖分解、离子转运、细胞增殖和细胞存活在成人正常组织的有氧状态下，HIF-la结合于抑癌基因Von HippeHLindauVHL蛋白，二者共存并成为蛋白酶体proteasome的底物而被降解,其生物半衰期仅有5min,因此在19例正常膀胱粘膜中未见到明显的HIF-la表达在肿瘤的发生及生长过程中，癌基因或抑癌基因改变会通过不同的信号传导途径激活HIFTa基因，其转录、表达增高EGF、IGF、PDGF等在膀胱肿瘤中上调表达的细胞因子都可诱导HIF-la表达HIF-la的下游基因有40余种早在1955年Thomlinson andGray就观察到肿瘤细胞围绕着血管呈簇状生长，此后的病理生理研究发现,氧在组织中的弥散距离为180um,距毛细血管180um以外的肿瘤细胞发生坏死肿瘤的生长必须有新生毛细血管形成以供应肿瘤细胞;肿瘤组织生长快，代谢旺盛,大量的代谢产物需要运走,也需要有新生血管形成;基因改变、肿瘤细胞快速生长所造成的缺氧环境都可诱导HIF-la的表达,而HIF-la又可调节起其下游基因表达而促进血管形成和肿瘤生长复发是膀胱肿瘤的一大特点,也是膀胱肿瘤防治中的难题准确预测膀胱肿瘤复发的危险度,指导临床选择有效防治方案可望能提高膀胱肿瘤的治疗效果膀胱肿瘤复发机制是复杂的,和肿瘤本身的生物学特性、机体免疫调节等多种因素相关但是，调节血管形成也是肿瘤复发的重要条件，因为和新生肿瘤的生长一样,复发肿瘤也需要新生血管供应营养、运输代谢产物,维持肿瘤生长发展的适宜环境Bochner等在一组膀胱肿瘤研究中把血管密度分为高、中、低三级，统计发现血管密度和肿瘤复发有关HIFTa在肿瘤的发生、发展中具有重要作用，它不仅调节血管形成、调节众多的下游基因以维持或促进肿瘤的发展,而且它可反馈接受肿瘤生长过程中所产生的因子或缺氧环境上调表达，如此形成恶性循环促进肿瘤生长，调节肿瘤的生物学特性HIF-la的表达指数可作为膀胱肿瘤恶性程度及复发危险性的预测标志,HIF-la也可作为生物治疗的靶点。