清洁验证分析方法验证

一、制定依据:《药品GMP指南》（口服固体制剂）、《药品生产验证指南》（2003年版）、《中国药典》（2020年版）

二、内容、术语1清洁L1清洁是指设备中各种残留物（包括微生物及其代谢产物）的总量低至不影响下批产品的规定的疗效、质量和安全性的状态方法验证

1.2方法验证系指根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检验项目的要求采用非法定分析方法，均应当进行方法验证（方法转移除外）、清洁验证分析方法验证的适用范围、目的和发起时机2表清洁验证分析方法验证的适用范围、目的和发起时机1内容适用范围目的发起时机

1.建立分析方法时；证明采用的分析方

2.变更制剂组分时；清洁验证分析方

1.采用新的检验方法；法适合于相应的检

3.修订原分析方法时；法验证

2.检验方法需变更的测要求

4.残留限度发生改变，超出原验证范围时、清洁验证分析方法验证3清洁验证分析方法验证的一般原则

3.1用于清洁验证的常规检验项目（如性状、pH、电导率、TOC等）的分析方法可豁免方法验证对于药物残留检测的分析方法，应进行方法验证，方法验证指标包括专属性与系统适用性、检测限、定量限、线性范围、棉签擦拭回收率、淋洗水回收率专属性与系统适用性试验

3.

2.

13.

2.

1.1专属性清洁验证分析方法的专属性主要是考察空白溶剂、阴性样品（空白辅料）、空白棉签在主成分保留时间处是否存在干扰，考察采用的分析方法能否正确测定被测物质

321.2系统适用性试验系统适用性试验是考察多次重复测定时，各测定值之间的接近程度在进行色谱分析方法验证时，应配制100%限度浓度对照品溶液，连续进样6针进行重复性验证，计算保留时间和峰面积（或响应值）的RSD数据要求专属性试验中，空白溶剂、阴性样品（空白辅料）、空白棉签在主成分保留时间处应无干扰色谱峰，如主成分峰附近有其他色谱峰，分离度应符合要求系统适用性试验中，6针保留时间的RSD应不得过

1.0%,峰面积（或响应值）的RSD应符合表1中相应浓度的重复性RSD要求表1样品中待测定成分含量与精密度RSD可接受范围待测定成分质星待测定成分含量分数重复性重现性RSDr%RSDR%或或ppm mg/g%K/KPPb100一lOOOmg/g

1.o1210100OOOppm lOOmg/g

0.

11.53110OOOppm lOmg/g

0.

01240.1lOOOppm Img/g

0.OOI

360.011OOppm100pg/g

0.

0001480.0011Oppm1Ogg/g

0.OOO

016110.0001Ippm lpg/g

0.000001816lOppb

0.Olpg/g

0.000OOO011532此表源自《AOAC Guidelinesfor SingleLaboratory Validationof》Chemical Methodsfor DietarySupplements andBotanicals检测限（）

3.

2.2LOD检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量对于限度试验和定性鉴别应进行检测限试验，检测限没有定量意义根据不同检验方法，可以采用下列不同方法测得检测限直观法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量本法主要适用于非仪器分析方法

322.2信噪比法用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的被测物质最低浓度或量一般以信噪比为3:1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限此外，检测限溶液应连续测定3次，计算峰面积的RSD本法主要适用于色谱法基于空白响应值标准偏差和标准曲线斜率法按照LOD=

3.33/S公式计算式中LOD检测限；3测定11次空白响应值的标准偏差；S标准曲线的斜率本法主要适用于光谱法数据要求应附测试图谱如有，应说明测试过程和检测限结果此外，检测限溶液峰面积或响应值的RSD应W20%n=3定量限

3.

2.3LOQ定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求进行清洁验证药物残留量检测前应确定方法的定量限，残留限度在定量限浓度以上时，方可采用此法进行药物残留量检测根据不同检验方法，可以采用下列不同方法测得定量限

3.

2.

3.1直观法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地定量测定的最低浓度或量本法主要适用于非仪器分析方法

323.2信噪比法用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量一般以信噪比为10:1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限止匕外，定量限溶液应连续测定6次，计算保留时间和峰面积的RSD本法主要适用于色谱法

323.

3.3基于空白响应值标准偏差和标准曲线斜率法按照LOD=103/S公式计算式中LOD检测限；3测定11次空白响应值的标准偏差；S标准曲线的斜率此外，定量限溶液应连续测定6次，计算响应值的RSD本法主要适用于光谱法A数据要求

3.

2.3应附测试图谱（如有），应说明测试过程和定量限结果此外，定量限溶液保留时间的RSD应不得过

2.0%,峰面积（或响应值）的RSD应符合精密度项下相应浓度的重复性RSD要求线性、范围

3.

2.4线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈比例关系的能力范围系指分析方法能达到精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间试验方法

3.

2.

4.1应在设计的范围内测定线性关系可用同一对照品贮备液经精密稀释，或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，至少制备5个不同浓度水平（可为定量限浓度、限度浓度的25%、50%、100%、150%（或200%））,每个浓度各1份，每份溶液分别测定2次以浓度为横坐标，峰面积（或响应值）为纵坐标，绘制标准曲线必要时，峰面积可经数学转换，再进行线性回归计算数据要求

3.

2.

4.2应列出线性图和回归方程y=ax+b,相关系数r》

0.995,|b|/yW25%（其中b为回归方程的截距，y为x=100螂艮度浓度时按照回归方程计算的y值）综合回收率

3.

2.5生产过程中，清洁验证的取样方法有棉签擦拭取样法和淋洗水取样法，其中棉签擦拭取样法适用于最难清洁部位的取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物水平来评价整套生产设备的清洁状况淋洗水取样法适用于不便拆卸或不宜拆卸的设备，擦拭取样不易接触到的表面，尤其适用于设备表面平坦、管道多且长的生产设备为保证取样方法的准确性，需对棉签擦拭取样法和淋洗水取样法进行回收率试验棉签擦拭回收率

3.

2.

5.1试验方法

3.

2.

5.

1.

1.1准备与设备内表面材质相同的板材4块，尺寸为15cmx15cm或其他适宜的尺寸，如平整光洁的316L不锈钢板

3.

2.

5.

1.

1.2计算所要擦拭表面的面积，每个擦拭部位擦拭的面积应以获取残留物的量在检测方法的线性范围内为原则通常可取25cm2或100cm

23.

2.

5.

1.

1.3配制适宜浓度的样品溶液和阴性溶液，分别取一定体积的空白溶剂、阴性溶液和样品溶液涂布于上述区域内，空白溶剂和阴性溶液分别涂布1个区域，样品溶液需涂布3个涂布量，分别为50%残留限度或更低、100%残留限度和150%（或200%）残留限度，每个涂布量分别涂布3个区域

3.

2.

5.

1.

1.4自然挥干或用吹风机温和地吹干

3.

2.

5.

1.

1.5用适宜的溶剂润湿棉签，并将其靠在溶剂瓶口挤压以除去多余的溶剂将棉签头按在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面,在向前移动的同时将其从一边移到另一边，擦拭过程应覆盖整个表面翻转棉签,用另一面同法擦拭同一方块区域，但与前次擦拭移动方向垂直（如下图所示），每擦拭一个方块区域后更换棉签一个区域擦拭棉签的数量需要经过验证确定，以满足回收率要求

3.

2.

5.

1.

1.6完成后，将棉签放入试管中，盖紧密封，并注明样品信息

3.

2.

5.

1.

1.7在上述试管中分别加入预定溶剂2〜20ml（加入量以保证供试品溶液中待测成分浓度在线性范围内为宜），超声适宜时间以提取棉签中的残留物,分别制得棉签擦拭空白溶液、棉签擦拭阴性溶液和各浓度供试品溶液

3.

2.

5.

1.

1.8经验证的分析方法检验，对照品溶液第（二1）步连续进样5针,对照品溶液

（2）连续进样2针，棉签擦拭空白溶液、棉签擦拭阴性溶液和各浓度供试品溶液各进样1针，记录色谱图，计算待测成分回收率及平均综合回收率,并计算回收率RSD

3.

2.

5.

1.

1.9要求棉签擦拭空白溶液和棉签擦拭阴性溶液在待测成分主峰位置应无干扰，各浓度供试品溶液单个回收率270%,平均综合回收率270%,RSD

10.0%n=9注意:擦拭取样过程的验证实际上是对棉签和溶剂的选择、取样人员的操作、残留物转移到棉签的方法、棉签上残留物提取方法的全面考察验证过程应注意如下内容1棉签的选择应能被擦拭溶剂良好的润湿；有一定的机械强度和韧性,并不易脱落纤维；能与擦拭溶剂和提取溶剂相兼容，不对残留物检测产生干扰2润湿棉签溶剂的选择擦拭溶剂不得在设备上遗留有毒物质；应使擦拭取样有较高的回收率；不得对残留物的检测产生干扰3应由实施清洁验证时的取样人员进行擦拭取样方法验证，以保证实施清洁验证时擦拭的操作与验证时完全一致4应按照预先开发并经验证的方法进行检验淋洗水回收率

3.

2.

5.

2.1试验方法

3.

2.

5.

2.

1.1准备与设备表面材质相同的板材4块，尺寸为15cmxl5cm或其他适宜的尺寸，如平整光洁的316L不锈钢板

1.

1.

1.

1.

1.1涂布区域，通常可取25cm2或100cm2o配制适宜浓度的样品溶液和阴性溶液，分别将空白溶剂、阴性溶液和

3.

2.

5.

2.

1.3样品溶液涂布于上述选定的区域内，空白溶剂和阴性溶液分别涂布1个区域，样品溶液需涂布6个区域样品涂布量为残留限度X冲洗液体积自然挥干或用吹风机温和地吹干

3.

2.

5.

2.

1.

43.

2.

5.

2.

1.5分别用50ml注射器逐次吸取适宜的溶剂常用水500ml〜2000ml冲洗上述涂布区域，每一区域的冲洗液分别合并至烧杯中，混匀，分别制得空白冲洗液、阴性样品冲洗液和供试品冲洗液

3.

2.

5.

2.

1.6验证的分析方法检验，对照品溶液1连续进样5针，对照品溶液2连续进样2针，空白冲洗液、阴性样品冲洗液和供试品冲洗液各进样1针，记录色谱图，计算回收率及平均综合回收率，并计算回收率RSD要求

3.

2.

5.

2.

1.7空白冲洗液和阴性样品冲洗液在残留物主峰位置应无干扰，各浓度供试品溶液单个回收率270%,平均综合回收率之70%,RSD

10.0%n=9研究

3.

2.

5.

2.

1.8溶液的稳定性研究用来证明根据相应方法制备的供试品溶液和对照品溶液在规定的储存条件下在一定时间内保持稳定样品溶液和对照品溶液依据标准的方法进行配制，在室温或其他条件下如冰箱2〜8℃储存适当的时间每个时间点，用新鲜配制的对照品溶液做对照考察时间点在同一天的可使用同一份对照品溶液，测定储存的样品溶液和对照品溶液，测定结果与初始结果进行比较，符合接受标准便可确认样品溶液和对照品溶液在规定的储存条件和储存时间内稳定验证

3.

2.

5.

2.

1.

93.

2.

7.1在某些情况下，如制剂处方改变、分析方法发生部分改变、残留限度改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法可靠

3.

2.

7.2再验证原则根据改变的程度进行相应的再验证

3.

2.

7.

2.1当制剂的处方组成改变、辅料种类变更时，可能会影响方法的专属性和综合回收率，因此需要对专属性和综合回收率进行再验证

3.

2.

7.

2.2当检验方法中某一参数发生改变时,如采用高效液相色谱法测定时,检测波长发生改变，则需要重新进行专属性与系统适用性、检测限、定量限、线性范围、综合回收率等内容的验证，证明修订后分析方法的合理性、可行性32723残留限度发生改变时，超出原验证范围，应进行线性范围、综合回收率等内容的验证

3.

2.

7.3方法再验证是对分析方法的完善过程，应根据实际改变情况进行再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制药品的内在质量、清洁验证分析方法验证的程序5方案的准备

5.1在分析方法验证开始前，必须完成方案的起草、审核、批准应由有经验的人员进行方法验证方案的起草，以保证分析方法验证工作的全面性和可接受标准制定的合理性方案应符合下列要求1详细描述被执行的程序；2说明验证的原则和目的；3明确规定验证的项目和可接受标准；4验证试验中使用的仪器、对照品、样品等信息；5明确职责方案的实施

5.2在方案的实施过程中，应注意以下方面的内容1实施方法验证的人员必须是经培训合格的上岗人员；2方案实施前应进行方案的培训，使参与实施的人员均能正确理解方案的内容和要求；3所用分析仪器已经过确认和校准，且在有效期内；4试验必须依据预先确定和批准的方案进行，并有记录；5试验过程中任何偏差或异常均需进行原因调查，并进行记录，需在确认/验证报告中进行分析评估报告的起草与批准

5.3方法验证工作完成后，应按规定的模板出具报告，并经审核和批准报告中必须明确的写出结果和结论，包括评价和建议文件的存档

5.4方案、所有原始记录、报告均应集中存档，并长期保存。