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文本内容:
实验十一蛋白质与氨基酸的显色反应
一、实验目的、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式
1、了解蛋白质和某些氨基酸的显色反应原理
2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法3
(一)双缩胭反应、实验原理1尿素加热至℃左右生成双缩月尿并放出一分子氨双缩月尿在碱性环境中能与川结合1802+生成紫红色化合物,此反应称为双缩胭反应蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩胭相似,也能发生此反应可用于蛋白质的定性或定量测定一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩胭反应,但有双缩版反应的物质不一定都是蛋白磴性溶液C0质或多肽、实验器材及试剂2()器材试管、酒精灯、试管夹、试管架1()试齐小)尿素21)氢氧化钠溶液210%)硫酸铜溶液紫红色铜双缩麻络合物31%)卵清蛋白溶液,或新鲜鸡蛋清溶液(将鸡蛋清用蒸储水稀释倍,42%10-20层纱布过滤,滤液冷藏备用)
3、实验步骤3()取少量尿素结晶,放在干燥试管中用微火加热使尿素熔化熔化的尿素开始硬化时,停1止加热,尿素放出氨,形成双缩月尿冷后,加氢氧化钠溶液约毫升,振荡混匀,再加10%1硫酸铜溶液滴,再振荡观察出现的粉红颜色避免添加过量硫酸铜,否则,生成的蓝色氢1%1氧化铜能掩盖粉红色()向另一试管加卵清蛋白溶液约毫升和氢氧化钠溶液约毫升,摇匀,再加2110%21%硫酸铜溶液滴,随加随摇,观察紫玫色的出现2
(二)荀三酮反应、实验原理1除脯氨酸、羟脯氨酸和荀三酮反应产生黄色物质外,所有氨基酸及一切蛋白质都能和苛三a-酮反应生成蓝紫色物质该反应十分灵敏,浓度的氨基酸水溶液即能给出反应,是11500000一种常用的氨基酸定量测定方法茴三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成、和醛,水合玮三酮被还原成还82NH3原型苛三酮;第二步是所形成的还原型苛三酮同另一个水合黄三酮分于和氨缩合生成有色物质此反应的适宜为同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同条件下的颜色深浅不同,酸度过大pH5-7,pH时甚至不显色此反应目前广泛地应用于氨基酸定量测定、实验器材及试剂2()器材试管、酒精灯、试管夹、试管架1()试剂)蛋白质溶液同上21)甘氨酸溶液
20.5%)苗三酮水溶液
30.1%)荀三酮-乙醇溶液
40.1%、实验步骤3()取支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液毫升,再各加毫升黄三酮水溶液,
1210.
50.1%混匀,在沸水浴中加热分钟,观察颜色由粉色变紫红色再变蓝1-2()在一小块滤纸上滴一滴的甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴上一滴荀三酮-乙醇
20.5%
0.1%溶液在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现
(三)黄色反应、实验原理1蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等,这类蛋白质可被浓硝酸硝化生成黄色的硝基苯的衍生物,该衍生物在酸性环境中呈黄色,在碱性环境中转变为橙黄色的硝醍酸钠绝大多数蛋白质都含有芳香族氨基酸,因此都有黄色反应皮肤、毛发、指甲等遇浓变黄即发生此类黄色反应结果HNO
3、实验器材及试剂2()器材试管、酒精灯、试管夹、试管架1()试剂)鸡蛋清溶液同上21)大豆提取液将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状用纱布过滤2)头发3)指甲4)苯酚溶液
50.5%)浓硝酸6)色氨酸溶液
70.3%)氢氧化钠溶液810%、实验步骤3向个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用6微火加热待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化10%管号123456材料鸡蛋清溶大豆提取指甲屑(少头发(少
0.5%苯酚
0.3%色氨液(4滴)液(4滴)许)许)(4滴)酸(4滴)浓硝酸滴滴滴滴242ml2ml44现象思考题、通过本次试验,你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?它们的原理
1、从本次实验的每个实验中,应该注意的事项都有哪些?2。