小鼠骨髓中性粒细胞分离

小鼠骨髓中性粒细胞的分离实验器材器械（眼科小直剪把，小弯镒把），无菌塑料滴管，离心管，管，2315ml4mlEP培养皿，注射器，尼龙筛网，低温离心机1ml70um试剂（）储存液（）溶液（PBS IX,10X,HBSS,percoll,percoll percolklOXPBS=9:1,percoll45%,分别用稀释储存液到相应浓度）小鼠中性81%,62%,55%,50%,1X PBSPercoll Histopaquelll9,粒细胞缓冲液（既含牛血清白蛋白，葡萄糖的溶液）MNB,

0.1%1%HBSS材料周小鼠8-12C57实验步骤.拉颈处死小鼠，分离其胫骨和股骨，用纱布将胫骨和股骨擦干净，置于酒精中浸泡175%5min.用小直剪剪掉骨髓两端，暴露骨髓腔，用冲洗，每次胫骨冲洗两次，股骨冲洗2MNB1mL3次.冲洗液用尼龙筛网过滤，离心收集细胞，低减速370um600g4℃lOmin,.弃上清，用溶液重悬细胞43ml45%percoll梯度准备溶液

5.Percoll3ml81%,2ml62%,2ml55%,2ml50%percoll.小心的将细胞悬液置于梯度上，无制动离心6percoll1600g,30min/0C,.弃掉层以上的溶液，收集之间的层762%percoll62%-81%percoll洗两次，离心弃上清，用重悬细胞

8.10mlMNB600g,10℃/0min,3mlMNB.将细胞悬液小心得置于无制动离心，去除红细胞层93mlHistopaquelll9±,1600g,10℃,30min,收集和之间的细胞层，洗两次，低减速离心

10.1119MNB lOmlMNB600g,4℃10min,.按需要将细胞用培养基重悬到一定的浓度11。