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单击此处添加副标题使用方法ELISA汇报人目录01添加目录项标题02E LISA原理03E LISA实验步骤04E LISA实验注意事项05E LISA实验应用01添加目录项标题02原理ELISA酶联免疫吸附试验原理原理利用抗原抗体特异性结合应用广泛应用于生物医学、食的原理,通过酶催化底物显色反品卫生、环境监测等领域应,检测样品中的抗原或抗体添加标题添加标题添加标题添加标题步骤样品处理、抗原抗体孵育、优点灵敏度高、特异性强、操酶催化底物显色、结果观察作简便、结果直观酶标抗体结合物制备抗体选择选择酶标抗体结合酶标抗体结合物酶标抗体结合物将酶与抗体结合,纯化通过离心、特异性强、亲和保存在低温、形成酶标抗体结过滤等方法纯化力高的抗体避光条件下保存合物酶标抗体结合物酶标抗体结合物显色反应原理抗原抗酶常用的酶底物常用的结果酶催化体结合后,加有辣根过氧化底物有邻苯二底物发生显色入酶标记的抗物酶、碱性磷胺、四甲基联反应,颜色深原或抗体,形酸酶等苯胺等浅与抗原抗体成抗原抗体复复合物的量成合物正比结果判定阳性结果出现两条色带,一阴性结果只出现一条色带,条在检测线,一条在质控线在质控线结果解释根据色带的出现情无效结果无色带出现,或出况,判断样本中是否存在待测现多条色带物质03实验步骤ELISA样品采集与处理样品处理对样本进行预处样品保存将处理后的样本理,如离心、过滤、稀释等保存在适当的条件下,如低温、避光等样品采集选择合适的样本,样品检测使用ELISA试剂如血液、尿液、组织等盒进行检测,按照说明书进行操作加样加样步骤将待测样品和标准品分别加入相应的孔中加样量根据实验要求,一般每个孔加入100μL加样顺序先加标准品,再加待测样品加样注意事项避免气泡产生,避免交叉污染温育目的使抗原和温度37℃时间30分钟至操作将反应液抗体充分结合1小时加入酶标板中,轻轻混匀,放入温育箱中温育洗涤洗涤方式轻轻震荡或旋转洗涤液PBS或TBS洗涤时间每次5-10分钟目的去除未结合的抗体和抗原洗涤温度室温或4℃洗涤次数一般3-5次注意事项避免洗涤液污染样品加酶标抗体目的检测抗原与抗体的步骤将酶标抗体加入反浓度根据实验要求选择结合应体系中合适的浓度反应时间根据实验要求结果观察通过酶标仪检设定反应时间测结果,判断抗原与抗体的结合情况加底物显色加入底物将底孵育在室温下终止反应加入观察结果在酶物溶液加入酶标孵育一段时间,终止液,终止酶标仪上观察显色板中,轻轻摇匀使底物与酶结合与底物的反应结果,记录OD值结果判定观察颜色变化根据颜色深浅判断结果计算OD值通过仪器测量OD值,判断结果判断阳性或阴性根据OD值和标准曲线判断结果重复实验对结果有疑问时,进行重复实验确认结果04实验注意事项ELISA实验前准备事项试剂准备确保所有试剂齐全且质量合格仪器准备确保所有仪器设备正常工作样品准备确保样品无污染且符合实验要求环境准备确保实验环境符合要求,如温度、湿度等实验中注意事项试剂准备确保所有试剂都经过质量控制,并按照说明书进行配制样本处理确保样本处理得当,避免污染和交叉污染实验操作严格按照实验步骤进行操作,避免操作失误结果分析确保结果准确可靠,避免误判和误读实验后处理事项清洗实验器材使用洗涤剂清洗实验器材,去除残留的试剂和样品保存实验数据记录实验数据,包括实验时间、实验结果等处理废弃物将实验废弃物分类处理,避免污染环境实验报告撰写实验报告,包括实验目的、实验方法、实验结果、实验结论等实验误差控制试剂选择选择高质量的试剂,避免因试剂质量问题导致的误差操作规范严格按照实验操作规程进行,避免因操作不当导致的误差环境控制保持实验环境稳定,避免因温度、湿度等环境因素导致的误差数据处理对实验数据进行准确记录和分析,避免因数据处理不当导致的误差05实验应用ELISA检测病毒抗体ELISA实验原理利用抗原抗体特异性结合的原理,检测样品中是否存在病毒抗体实验步骤样品处理、加样、孵育、洗涤、显色、终止、结果分析应用领域病毒感染性疾病的诊断、疫苗效果评价、病毒流行病学调查等注意事项实验操作要规范,避免交叉污染,结果分析要准确,避免误判检测细菌抗体实验原理利用抗实验步骤样品处应用领域医学、注意事项避免交原抗体特异性结合理、抗原抗体孵育、生物学、食品科学叉污染,确保实验的原理,检测样品洗涤、显色、结果等领域结果的准确性中是否存在特定细分析菌抗体检测寄生虫抗体抗体检测通过ELISA实验实验步骤样本处理、抗体检测寄生虫抗体孵育、洗涤、显色、结果分析等寄生虫种类包括但不限于结果解读根据实验结果判蛔虫、钩虫、鞭虫等断是否感染寄生虫,以及寄生虫种类和数量检测肿瘤标志物ELISA实验原理肿瘤标志物种类实验步骤样本结果分析根据利用抗原抗体特包括CEA、处理、加样、孵吸光度值判断肿瘤标志物浓度,异性结合的原理,CA
125、CA199育、洗涤、显色、进而判断肿瘤发检测肿瘤标志物等终止、读数等生和发展情况感谢观看汇报人。