还剩21页未读,继续阅读
本资源只提供10页预览,全部文档请下载后查看!喜欢就下载吧,查找使用更方便
文本内容:
《双向凝胶电泳》PPT课件•双向凝胶电泳简介•双向凝胶电泳实验流程•双向凝胶电泳的优缺点CATALOGUE•双向凝胶电泳的发展趋势和未来展望目录•双向凝胶电泳的实际应用案例01双向凝胶电泳简介CHAPTER双向凝胶电泳的定义双向凝胶电泳是一种分离蛋白质的技术,通过两次不同方向的电泳分离,将复杂的蛋白质混合物分离成单个成分它结合了等电聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理,能够分离出成千上万的蛋白质双向凝胶电泳的原理等电聚焦在第一向电泳中,蛋白质根据其等电点进行分离,聚焦在相应的pH区域SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在第二向电泳中,已经分离的蛋白质加入SDS(十二烷基硫酸钠)后带负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中按分子量大小进行分离双向凝胶电泳的应用010203蛋白质组学研究疾病研究生物样本分析用于鉴定和分离复杂蛋白质混合用于研究疾病过程中蛋白质的差用于分析生物样本中的蛋白质组物中的蛋白质,为蛋白质组学研异表达,发现与疾病相关的标志成,了解生物体的生理和病理状究提供基础数据物和治疗靶点态02双向凝胶电泳实验流程CHAPTER样本制备样本选择与处理选择适当的组织或细胞样本,进行适当的处理以提取蛋白质蛋白提取使用适当的缓冲液和试剂提取蛋白质,确保蛋白质的完整性和活性蛋白定量使用蛋白质定量方法确定蛋白质浓度,以便后续步骤中调整上样量2D-PAGE实验胶制备样品上样制备第一向等电聚焦凝胶和第二向将处理好的蛋白质样品上样到第一向SDS-PAGE凝胶等电聚焦凝胶中等电聚焦固相pH梯度第二向分离在第一向等电聚焦凝胶中进行等电聚将第一向分离后的蛋白质从凝胶中转焦,分离蛋白质移到第二向SDS-PAGE凝胶中进行第二向分离图像分析染色与脱色01对第二向分离后的凝胶进行染色和脱色,以便观察和检测蛋白质点图像采集02使用成像系统采集凝胶的图像蛋白质点检测与量化03使用图像分析软件检测凝胶中的蛋白质点,并进行相对定量分析蛋白质鉴定切胶与裂解肽段提取与净化从凝胶中切割感兴趣的蛋白质点,进行裂解提取裂解后的肽段并进行净化,去除干扰物质质谱分析数据库搜索与蛋白质鉴定将净化的肽段进行质谱分析,获取肽段序列将质谱分析结果与数据库进行比对,确定蛋信息白质的种类和序列03双向凝胶电泳的优缺点CHAPTER优点高分辨率高通量双向凝胶电泳可以分离出非常接近的蛋白质,能够同时分离大量的蛋白质,提高了实验的分辨率极高效率高灵敏度高重复性可以检测到低丰度的蛋白质,有助于发现新成熟的双向凝胶电泳技术具有很高的重复性,的蛋白质使得实验结果更加可靠缺点样品需求量大实验周期长人工操作繁琐高成本相对于其他技术,双向实验过程中需要人工进实验所需的试剂和设备整个实验过程需要数天,凝胶电泳需要的样品量行多个步骤,操作较为成本较高,使得实验成甚至数周的时间较大繁琐本增加04双向凝胶电泳的发展趋势和未来展望CHAPTER技术改进分辨率提升蛋白质鉴定技术的结合通过改进实验条件和优化实验参数,将双向凝胶电泳与蛋白质鉴定技术提高双向凝胶电泳的分辨率,使其能(如质谱技术)相结合,提高蛋白质够分离更接近的蛋白质鉴定的准确性和可靠性自动化程度提高研发更先进的自动化设备,减少人工操作,提高实验效率,降低实验误差应用拓展010203临床诊断生物标志物发现药物研发利用双向凝胶电泳技术对通过双向凝胶电泳技术寻利用双向凝胶电泳技术分疾病相关蛋白质进行分析,找新的生物标志物,用于析药物作用机制和靶点蛋为临床诊断提供更准确、疾病预警、监测和治疗白质,为新药研发提供支可靠的依据持研究展望蛋白质组学研究跨学科合作数据共享和分析随着蛋白质组学研究的深入,双加强与其他学科领域的合作,共建立蛋白质组学数据共享和分析向凝胶电泳技术有望在更广泛的同推动双向凝胶电泳技术的发展平台,促进双向凝胶电泳技术的领域发挥重要作用和应用交流和进步05双向凝胶电泳的实际应用案例CHAPTER在生物学研究中的应用蛋白质组学研究01双向凝胶电泳技术被广泛应用于蛋白质组学研究中,用于分离和鉴定蛋白质,揭示生物体的蛋白质表达谱和蛋白质之间的相互作用疾病机制研究02通过比较正常组织和病变组织的蛋白质表达谱,双向凝胶电泳可以帮助研究疾病的发生和发展机制,为疾病的诊断和治疗提供依据生物标志物发现03利用双向凝胶电泳技术可以发现与疾病相关的生物标志物,如肿瘤标志物、感染性疾病相关蛋白等,有助于疾病的早期诊断和预后评估在医学研究中的应用药物作用机制研究通过双向凝胶电泳技术分析药物作用前后蛋白质1表达谱的变化,有助于揭示药物的作用机制和靶点临床诊断利用双向凝胶电泳技术可以对患者的蛋白质表达2谱进行分析,辅助临床诊断,如对癌症、感染性疾病等的诊断个体化医疗通过对个体蛋白质表达谱的分析,可以制定个性3化的治疗方案,提高治疗效果并减少副作用在环境科学研究中的应用生态毒理学研究双向凝胶电泳技术可用于分析环境污染对生物体蛋白质表达谱的影响,揭示环境污染对生物的毒性作用机制有毒物质鉴定通过比较不同环境样本中蛋白质表达谱的差异,可以鉴定出有毒物质的存在和来源生态修复与保护利用双向凝胶电泳技术分析生物在污染环境中的适应机制,可以为生态修复和保护提供科学依据THANKS感谢观看。