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REPORTING2023WORK SUMMARY《酶的分离纯化》PPT课件•酶的分离纯化概述目录•酶的分离纯化方法•酶的纯化过程CATALOGUE•酶的纯度检测与活性测定PART01酶的分离纯化概述酶的分离纯化的定义01酶的分离纯化是指在实验条件下,通过一系列的物理和化学方法,将酶从复杂的生物样品中分离出来,并将其纯化的过程02这一过程通常包括细胞的破碎、离心分离、萃取、沉淀、过滤、层析等步骤,以便获得高纯度的酶酶的分离纯化的目的提高酶的纯度01通过分离纯化,可以将酶从其他生物分子中分离出来,从而获得高纯度的酶了解酶的性质02通过分离纯化,可以更好地了解酶的性质,例如酶的分子量、等电点、动力学常数等制备用于生物工程应用的酶03分离纯化是制备用于生物工程应用的酶的重要步骤,例如用于生物燃料、生物药物等的生产酶的分离纯化的原理根据酶的性质进行分离酶是一种具有生物活性的蛋白质,可以根据其性质进行分离例如,可以根据酶的分子量、等电点、疏水性等进行分离利用物理和化学方法进行分离物理方法包括离心、过滤、层析等;化学方法包括萃取、沉淀等这些方法可以单独使用,也可以结合使用,以便获得高纯度的酶PART02酶的分离纯化方法根据分子大小的分离方法离心分离法透析法超滤法利用酶分子在高速旋转下产生的利用半透膜原理,使小分子物质利用不同孔径的滤膜,使不同大离心力进行分离根据酶分子的通过半透膜进入另一侧,而大分小的酶分子得以分离小分子物大小和密度不同,通过调整转速子物质被截留在原侧通过不断质可以通过滤膜,而大分子物质和离心时间,将酶与其他杂质分更换溶液,将酶分子与其他杂质被截留在滤膜表面离开逐渐分离根据电荷性质的分离方法电泳法利用电场作用,使带电分子在电场中移动由于不同酶分子的电荷量和电泳行为不同,因此可以通过电泳法将酶与其他杂质分离离子交换法利用离子交换剂与带电分子间的相互作用进行分离根据酶分子所带电荷性质的不同,可以选择不同的离子交换剂进行分离亲和电泳在电泳过程中加入特异性配体,使目的酶与配体结合形成复合物,与其他杂质分离洗脱后可得到纯化的目的酶根据亲和性质的分离方法亲和色谱法免疫分离法吸附分离法利用目的酶与固定相上的配体利用抗体与抗原间的特异性结利用吸附剂与目的酶间的相互合进行分离将酶作为抗原,间的特异性亲和力进行分离作用进行分离根据目的酶的制备相应的抗体,通过免疫反将酶混合物通过亲和色谱柱,性质选择合适的吸附剂,将酶应将目的酶与其他杂质分离目的酶被吸附在柱上,通过洗与其他杂质分离开脱条件的选择,将其他杂质洗脱,得到纯化的目的酶PART03酶的纯化过程粗分级010203离心分离沉淀法过滤法通过高速离心机将酶与其利用不同物质在一定条件通过不同孔径的滤膜或滤他杂质进行分离,根据密下的溶解度差异,通过调纸将酶与大颗粒杂质进行度差异实现初步纯化节pH、温度等参数使酶沉分离淀析出细分级离子交换色谱亲和色谱利用离子交换剂的离子交换性利用酶与其他特定配基的特异质将酶与带电杂质进行分离性结合进行分离,如抗体、配体等疏水色谱高效液相色谱利用蛋白质的疏水性质,通过利用不同物质在固定相和流动与疏水配基的相互作用进行分相之间的分配系数差异进行分离离,具有高分辨率和高效性PART04酶的纯度检测与活性测定酶纯度检测的方法蛋白质含量测定电泳技术通过测定酶液中的蛋白质含量,可以初步判断酶的纯度利用电泳技术可以将酶蛋白与其他杂质有效分离,通过电常用的方法有Lowry法、Bradford法等泳图谱可以判断酶的纯度包括SDS-PAGE、Native-PAGE等技术质谱技术免疫学方法通过质谱技术可以精确测定酶蛋白的分子量,从而判断酶利用特异性抗体可以检测酶蛋白的存在,通过抗原-抗体的纯度质谱技术具有高灵敏度和高分辨率的特点反应可以判断酶的纯度例如ELISA、Western blot等方法酶活性测定的方法输入通过测定酶促反应的初速度,利用米氏方程计算出酶利用化学发光剂在酶的作用下发光,通过测定发光强标题的活性该方法需要精确控制反应条件,测定反应时化学发光法度可以计算出酶的活性该方法具有高灵敏度和高分间内的底物浓度变化辨率的特点动力学方法荧光法通过观察加入酶后的颜色变化,利用比色法可以计算利用荧光物质在酶的作用下产生荧光,通过测定荧光出酶的活性该方法具有操作简便、快速的特点,但比色法强度可以计算出酶的活性该方法具有高灵敏度和高可能受到颜色干扰的影响特异性的特点REPORTING2023WORK SUMMARYTHANKS感谢观看。